?Efecto del confinamiento en membranas lipídicas aniónicas. Estudio del diagrama de fases mediante microscopía de fluorescencia

A. BELLON; N. WILKE,

Congreso; 5to Congreso Argentino de Microscopia. SAMIC. La Falda, Córdoba.; 2018

Previamente en nuestro laboratorio encontramos que en membranas formadas por fosfolípidos zwitteriónicos, la cercanía de una superficie sólida disminuye el gap energético entre las fases ordenada y desordenada del film. Es decir que el confinamiento induce cambios en la energía libre de las fases, haciéndolas más parecidas desde el punto de vista termodinámico.En este trabajo estudiamos, mediante microscopía de fluorescencia, el diagrama de fases de una mezcla que contiene un lípido ionizable (ácido esteárico, SA). Variando el pH de la solución acuosa, analizamos el efecto de la ionización del lípido sobre el diagrama de fases de membranas soportadas y ?free-standing?. A pH ácidos, en donde el SA está neutro, el comportamiento fue similar al de los fosfolípidos: la energética de las fases coexistentes se hace más parecidas cuando están confinadas comparado con cuando no lo están. Sin embargo, cuando el SA se encuentra ionizado, la presencia del sólido no altera la energética de las fases.Una posible explicación del efecto del confinamiento es que el mismo provoque una reducción de la entropía de la fase desordenada debido a la perdida de grados de libertad de la membrana cuando está soportada. El principal motivo de esta pérdida entrópica sería debido a restricciones en las ondulaciones fuera del plano que presenta la fase desordenada. En este sentido, las membranas cargadas ya tienen este movimiento restringido. Esto es porque en membranas cargadas, las ondulaciones implican movimientos de la membrana y también de la doble capa iónica, lo que implica un costo energético adicional. Por tanto, proponemos que las membranas cargadas no sufren efecto de confinamiento debido a que las ondulaciones fuera del plano se encuentran restringidas aun en ausencia del sólido. Para verificar esta hipótesis, se prepararon vesículas unilamelares gigantes y se las observó mediante microscopía confocal. Esto permitió analizar las fluctuaciones de vesículas individuales a diferentes pHs y así, analizar la rigidez ante movimientos fuera del plano a diferentes grados de ionización.