ENSAYO DE ACTIVIDAD DE LA RHOGTPASA RAC1 DURANTE LA SENSIBILIZACIÓN A COCAÍNA INDUCIDA POR ESTRÉS

Cordoba

Congreso; Jornadas Científicas Sociedad de Biología de Córdoba; 2023

Estudios preclínicos que utilizan un modelo de adquisición de la conducta de autoadministración de psicoestimulantes han demostrado la interacción facilitadora entre el estrés y esta conducta en un proceso denominado sensibilización cruzada y que dichas alteraciones con-ductuales están mediadas por modificaciones estructurales duraderas en las neuronas del Núcleo Accumbens (NA). En un modelo de sensibilización cruzada entre estrés y cocaína, nuestro laboratorio ha demostrado que la exposición a estrés crónico por restricción de movimiento modifica la plasticidad sináptica del NA core (NAc) mediante la influencia proactiva que ejerce el estrés sobre la capacidad de cocaína de inducir cambios en las proteínas que regulan la dinámica del citoesqueleto en las espinas dendríticas como cofilina. La fosforilación e inactivación de cofilina a su vez está mediada por la actividad de una familia de proteínas denominadas RhoGTPasas como RhoA y Rac1. Las RhoGTPasas son proteínas de unión a nucleótidos guanina que ciclan entre un estado activo, unido a GTP, y un estado inactivo, unido a GDP. Particularmente Rac1 es conocida por jugar un rol central en la dinámica del citoesqueleto de actina en procesos de plasticidad sináptica en diversos desórdenes psiquiátricos y del neurodesarrollo. En este sentido, nuestro objetivo es caracte-rizar y cuantificar la actividad de Rac1 en NAc durante la sensibilización a cocaína inducida por estrés. Con tal fin desarrollamos un kit para llevar a cabo un ensayo de actividad de Rac1, el cual está basado en la vía de señalización cascada abajo de esta proteína y consistió en la producción de proteínas recombinantes que codifican para el dominio de unión a PBD de su efector PAK1 y su posterior conjuga-ción con esferas de agarosa para llevar a cabo un ensayo de inmunoprecipitación, en el cual se pretende precipitar la forma activa de Rac1 para luego ser revelada con un anticuerpo específico mediante western blot. Así, para nuestro modelo de sensibilización cruzada entre estrés y cocaína, se utilizarán ratas macho de tipo Wistar, las cuales se someterán a un protocolo de estrés por restricción de movi-miento consistente en sesiones de 2 h durante siete días, mientras que el grupo control se mantendrá en sus cajas. Dos semanas después del último estrés los animales estresados y control recibirán una inyección desafío de cocaína (10 mg/kg i.p). Posteriormente, el NAc será disecado y se llevará a cabo el ensayo de actividad por inmunoprecipitación. En base a estudios previos de nuestro laboratorio, en donde pudimos demostrar que la activación de cofilina es necesaria para expresión de sensibilización a cocaína inducida por estrés cróni-co y actúa como moduladora de las modificaciones plásticas estructurales en el NAc, esperamos encontrar, mediante este ensayo de inmunoprecipitación, una regulación negativa de la actividad de la proteína Rac1 en el NAc de los animales sensibilizados.