ESTUDIO DEL EFECTO DE ARNICA MONTANA L. EN FIBROBLASTOS HUMANOS

ROCIO MEINERO; AYELEN NIGRA; GERMAN A. GIL

Congreso; IV REUNIÓN CONJUNTA DE SOCIEDADES DE BIOLOGÍA DE LA REPÚBLICA ARGENTINA; 2020

SOC ARG BIOLOGIA

La reparación de heridas es uno de los procesos biológicos más complejos que ocurren durante la vida humana. La búsqueda de agentes que aceleren este proceso y logren una reconstitución del tejido, es uno de los desafíos más antiguos en las ciencias naturales. Arnica montana L. (A. montana) es una planta perenne herbácea perteneciente a la familia Asteraceae, de la cual se extrae un compuesto con gran uso en aplicaciones clínicas de práctica actual, así como en la medicina alternativa y complementaria (homeopatía).Para el presente trabajo de investigación se utilizaron cultivos celulares de la línea celular HS-5, los cuales son fibroblastos provenientes de médula ósea. Para tratar a las células se emplearon extractos de Árnica Montana los cuales fueron diluidos en medio de cultivo DMEM y luego llevados a las diluciones de trabajo necesarias.Evaluamos el efecto de Arnica montana sobre la viabilidad celular utilizando ensayos de MTT y azul de tripan y hemos podido concluir que en tratamientos de 24 y 72h Arnica montana 1 ug/ml estimula la proliferación celular. Por otro lado, utilizando los dos métodos de detección anteriores, hemos identificado las concentraciones citotoxicas de Arnica montana para las células en estudio, tanto a las 24h como a las 72 h de tratamiento. Las mismas van desde los 4000 a los 10000 ug/ml. Para estudiar el posible efecto de Arnica m. en la migración celular utilizamos la técnica de Transwell, donde tratamos a las células con 0, 1 y 1000 ug/ml de Arnica m. y luego de las 72 h fijamos las células que lograron migrar y teñimos los núcleos con DAPI para poder contarlos bajo microscopio de fluorescencia. Hemos podido resolver que 1 ug/ml de Arnica montana estimula la migración celular.Con el fin de analizar el efecto de los extractos sobre las distintas fases del ciclo celular, los fibroblastos fueron tratados y luego se tiñó el ADN celular con ioduro de propidio y se reveló mediante citometria de flujo. La mayoría de las células control se encontraron en la fase G0/G1 del ciclo celular. Las tratadas con 1 μg/ml de extracto, presentaron un porcentaje significativamente mayor de células en la fase M, proliferativa, con respecto al control. Conjuntamente, se puedo destacar que a medida que aumenta la concentración del extracto, también lo hace el porcentaje de células en la fase S del ciclo celular en detrimento de la fase G0/G1.En base a que nuestros resultados indican un aumento de la proliferación celular por efecto de A. montana, a continuación, analizamos marcadores característicos del estado proliferativo por inmunoflourescencia como son la proteína PCNA y Ki67. Conjuntamente, para verificar que los tratamientos con el extracto no afectaran la morfología celular, se marcaron las células con anticuerpo antitubulina y la toxina Faloidina para visualizar actina.Finalmente, se analizaron los niveles de expresión de la proteína PCNA en células bajo el efecto de A. montana por inmuno blot.