POSIBLE ANCLAJE DE LOS MICROTUBULOS A LA MEMBRANA PLASMATICA A TRAVES DE SU INTERACCION CON LA Na,K-ATPasa
Guillermo G. Zampar, Agustín Carbajal, Verónica Santander, Natalí Chanaday, Nicolás Díaz, César H. Casale y Carlos A. Arce. Ciquibic (Conicet)-Departamento de Química Biológica, Fac. Ciencias Químicas (U.N.Cba).
La Na+/K+-ATPasa es una proteína integral de membrana que cataliza la salida de tres Na+ y la entrada de dos iones K+ a la célula. Habíamos demostrado que esta enzima puede interaccionar con tubulina del isotipo acetilado resultando inhibida la actividad catalítica. Esta interacción fue demostrada por el comportamiento hidrofóbico de la tubulina (típicamente es hidrofílica) durante partición en Triton X-114, y por su precipitación cuando se usa anti-Na,K-ATPasa unida a perlas de Sepharosa. En este trabajo: 1) Confirmamos la existencia del complejo ya que ambas proteínas co-eluyeron durante cromatografía de filtración molecular en una zona de PM mayor al de las proteínas por separado; 2) Mediante afinidad de la tubulina acetilada con péptidos sintéticos y recombinantes unidos a columnas de Sepharosa, identificamos tentativamente el fragmento citoplasmático de la ATPasa que interacciona con tubulina; 3) Estudiamos si en la célula viva, la tubulina que interacciona con la ATPasa es ?tubulina soluble? o ?tubulina integrante de microtúbulos (MTs)?. Cuando membranas disueltas con detergente fueron incubadas con MTs purificados, la Na,K-ATPasa co-sedimentó con la fracción de MTs. En otro tipo de experimento, aislamos MTs nativos de cerebro de rata encontrándose Na+/K+-ATPasa en esta misma fracción sugiriendo que la ATPasa está asociada a los microtúbulos. Nuestros resultados sugieren que la Na+/K+-ATPasa podría actuar como punto de ?anclaje? de los MTs en la membrana plasmática.
