Inducción de tolerancia oral con un péptido híbrido de LTB y el dominio C de Sinapsina en la EAE: Supresión de la enfermedad, inducción de Treg funcionales y modulación del balance de citoquinas Scerbo MJ, Bibolini MJ, Roth GA, Monferran CG.
Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba (CIQUIBIC)- Dpto. de Química Biológica, Fac. de Ciencias Químicas, UNC. Córdoba, Argentina. jscerbo@mail.fcq.unc.edu.ar
El objetivo de este trabajo fue caracterizar el perfil de citoquinas y las poblaciones de células T CD4+ inducidas por un protocolo de tolerancia oral utilizando una proteína de fusión (LTBSC) entre la subunidad B de la toxina lábil al calor de E. coli (LTB) y el dominio C de sinapsina (SC) en la encefalomielitis autoinmune experimenta (EAE). La EAE es una enfermedad demielinizante autoinmune mediada por células T CD4+ autorreactivas contra epitopes de la proteína básica de mielina. LTB es usada como vehículo para dirigir antígenos al GALT y modular respuestas agresivas contra antígenos propios. Ratas Wistar de 35 días fueron alimentadas oralmente con 4 dosis de 10 mg de LTBSC, una mezcla equimolar de LTB+SC o vehículo, los días 10, 8, 6 y 4 previos a la inducción de la EAE. Se extrajeron células mononucleares (CMN) de nódulos linfáticos mesentéricos, ganglios inguinales y de bazo de los animales tratados previo a la inducción de la EAE y durante el periodo agudo de la enfermedad. Se analizó la producción de IL-4, IL-10, TGF-b e INF-g en los sobrenadantes del cultivo de CMN. Estas células también fueron marcadas con anticuerpos contra CD4, CD25 y FoxP3, y se analizaron las poblaciones regulatorias. Se aislaron células CD4+CD25+ (Treg) y CD4+CD25- (Teff) para realizar cocultivos en presencia de PBM o IL-2+ aCD3. El tratamiento oral con LTBSC produjo un aumento significativo de células CD4+CD25+FoxP3+ y de los niveles de IL-4, IL-10 y TGF-b y una disminución de INF-g previo a la inducción de la EAE y luego de la inducción durante el periodo agudo. Estos cambios estuvieron acompañados de una disminución en la incidencia de la enfermedad del 50% con respecto al grupo control. Las células Treg aisladas de estos animales suprimieron la proliferación de células Teff en presencia de ambos estímulos, demostrando la capacidad supresora de la población regulatoria inducida por el tratamiento con LTBSC. El tratamiento oral con LTBSC redujo la incidencia de la EAE en un 50% mediante la inducción de un microambiente regulatorio caracterizado por un aumento en el número de células Treg, en los niveles de citoquinas anti-inflamatorias y una disminución del nivel de INF-g.
