Caracterización de cultivos primarios de células de Müller de ratón. Identificación del LRP-1.

BARCELONA PABLO; LUNA-PINTO JOSÉ; JUAREZ PATRICIO; ORTIZ SUSANA; CHIABRANDO GUSTAVO; RIERA CLELIA MARÍA; SÁNCHEZ MARÍA CECILIA

Mar del Plata

Congreso; I Congreso Nacional de Investigación en Visión y Oftalmología (IVO) (2005); 2005

SAIC: Sociedad Argentina de Investigación Clínica

CARACTERIZACION DE CULTIVOS PRIMARIOS DE CELULAS DE MÜLLER DE RATÓN. IDENTIFICACION DEL LOW-DENSITY LIPOPROTEIN RECEPTOR-RELATED PROTEIN (LRP-1). Autores: Barcelona PF1, Luna JD2, Juarez P2, Ortiz S1, Chiabrando GA1, Riera CM1, Sánchez MC1. 1- CIBICI (CONICET)- Departamento de Bioquimica Clinica, Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Nacional de Córdoba, Av H. de la Torre y M. Allende, Ciudad Universitaria (5000) Córdoba, e-mail: pbarcelona@mail.fcq.unc.edu.ar 2- Departamento de Oftalmología, Fundación VER, Córdoba, Argentina. Propósito: Las células de Müller (CM) son células gliales de la retina que preservan la estructura y función de los fotoreceptores durante la degeneración retinal. Recientemente ha sido demostrado que estas células participan en el proceso de neovascularización bajo condiciones de hipoxia pero los mecanismos moleculares involucrados son al presente poco conocidos. LRP-1 es un receptor endocítico multiligando expresado en neuronas, macrófagos, fibroblastos y junto con a2-M participa en el control de la proteólisis extracelular. Al respecto, resultados previos de nuestro grupo demuestran que el Sistema a2-Macroglobulina/LRP-1 es expresado en retinas de ratas con neovascularización inducida por hipoxia sugiriendo que LRP-1 puede modular la neovascularización retinal. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue caracterizar a nivel molecular un cultivo primario de células gliales aisladas de retina de ratón con el propósto de, en primer lugar, identificar en CM la expresión de LRP-1, y en segundo lugar, emplear este cultivo primario para futuros estudios relacionados con el proceso neovascular. Métodos: Las células gliales fueron aisladas de ratones C57BL/6 mediante digestión enzimática y mecánica y luego caracterizadas por inmunocitoquímica para marcadores específicos tales como CRALBP, vimentina y GFAP. La expresión de LRP-1 fue analizada por western blot e inmunocitoquímica. Resultados: Aproximadamente el 95-100% de las células gliales fueron Müller a juzgar por la expresión de los marcadores específicos. Más del 95% de las células fueron positivas para CRALBP y vimentina y menos del 2% fueron positivas para GFAP. Por ensayos de Western blot, se detectó expresión de LRP-1 utilizando un anticuerpo dirigido contra la cadena β del receptor y estos resultados fueron corroborados por ensayos de inmunofluorescencia. Conclusiones: Se obtuvieron cultivos primarios altamente enriquecidos en CM con capacidad de expresar LRP-1. Estos cultivos constituyen una importante herramienta experimental para el estudio de la neovascularización involucrando al Sistema a2-Macroglobulina/LRP-1.