ANÁLISIS DE INTERACCIONES LÍPIDO-PROTEÍNA POR ESPECTROSCOPÍA RAMAN EN PLATAFORMAS SERS

Tucumán

Congreso; III Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina, XX Jornadas Soc. Biología de Cba; 2015

Sociedades de Biología de la República Argentina

Se estudió por espectroscopía Raman-SERS (Surface-Enhaced Raman Spectroscopy) la interacción entre fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP2) y MARCKS, una proteína intrínsecamente desordenada con un dominio efector (DE) que interacciona con PIP2.y participa en la señalización neuronal. Obtuvimos plataformas SERS por electrodeposición de nanopartículas de Ag con distintas dimensiones, forma y distribución mediante varios programas potencial-tiempo. Se generaron plataformas óptimas por deposición de cristalitas Ag (tamaño ≈ 90 nm) en KClO4 0,1 M/AgClO4 1,0 mM con un pulso de -0,5 V y 300 s. Con ellas se estudiaron por microscopía SERS, SEM y análisis elemental (EDS) monocapas de Langmuir-Blodgett o gotas de PIP2, MARCKS y mezclas. El efecto SERS depende del ordenamiento molecular. Las señales Raman se intensifican 10 veces para MARCKS organizada en monocapa. Señales específicas de Phe y de K indican que la interacción con el sustrato es a través del DE. Estas, junto al estiramiento υC?COO- a 940 cm-1 (estructura α-hélice), sufren un corrimiento al azul cuando la proteína no está organizada en monocapa. Señales Amida I también indican a-hélice. Concluímos que MARCKS adquiere estructura de a-hélice al interaccionar con el sustrato SERS si está organizada en monocapa. El aumento de intensidad de señales 850-1100 cm-1de PIP2 indica interacción directa de la cabeza polar con Ag, y la menor intensidad de estiramientos C-H indica alejamiento de las cadenas hidrocarbonadas del sustrato SERS. La desaparición de las señales Amida I indica que la interacción de MARCKS con PIP2 abole la estructura en a-hélice, y un corrimiento al azul de la señal de ring-breathing de Phe sugiere que el DE está involucrado en esta interacción. La imagen SEM de la monocapa de mezcla lípido-proteína muestra dominios condensados de morfología fractal.