Actividad de la enzima ALDH2 en el organismo modelo Caenorhabditis elegans: potencial biomarcador de la enfermedad de Parkinson

LUCIA FERNANDEZ HUBEID; ALBRECHT, PAULA A.; DEZA-PONZIO, ROMINA; CANCELA, LILIANA M.; VIRGOLINI MIRIAM B

Jornada; VIII Jornadas de Posgrado y II Jornadas de Ciencia y Tecnología de la Facultad de Ciencias Químicas; 2018

Las enzimas aldehído deshidrogenasas (ALDHs) juegan un rol clave en el organismo metabolizando los aldehídos tóxicos generados tanto por estrés oxidativo como por el metabolismo de etanol, así como los que provienen de la degradación de aminas biogénicas. Entre ellos, el DOPAL (3,4-dihidroxifenilacetaldehído), primer metabolito de dopamina (DA) es sustrato de las enzimas ALDHs, particularmente la ALDH mitocondrial (ALDH2) y ALDH1A1. Una inadecuada disposición de este aldehído resulta en su acumulación cerebral dando origen a la hipótesis catecolaldehídica de la enfermedad de Parkinson. Interesantemente, pesticidas que inhiben a ALDH2 (benomyl) o a la regeneración de su cofactor NAD+ en el complejo I mitocondrial (paraquat, rotenona) han sido relacionados con la etiopatogenia de esta enfermedad. Sobre estos antecedentes, resulta de interés evaluar la funcionalidad de ALDH2 y establecer su correlación con alteraciones neuroconductuales observadas en un organismo modelo cuyo genoma está completamente descripto. Específicamente, el presente trabajo aborda el aislamiento de la fracción mitocondrial de C. elegans para la determinación de actividad de ALDH2. Poblaciones de gusano N2 (cepa salvaje) serán mantenidas en placas de agar sembradas con bacterias OP50 y sincronizadas para obtener gusanos jóvenes (estadio L3. Posteriormente serán lavadas, resuspendidas en bufferM9, homogeneizadas con buffer de ruptura y centrifugadas para obtener el sobrenadante a usar en la determinación de ALDH2 mediante el registro de la absorción de NADH a 340 nm. La concentración de proteínas se medirá por el método de Bradford. En experimentos futuros se espera que el estudio de la funcionalidad de esta enzima mediante su actividad, así como de su expresión en la cepa N2 y en BC11202 (cepa cuyo gen alh1 -ortólogo a ALDH2- está asociado a green fluorescent protein (GFP) y su asociación con conductas motoras permitan evidenciar alteraciones inducidas por los pesticidas mencionados anteriormente y aportar evidencias a la participación de esta enzima en la etiopatología de la enfermedad de Parkinson.