Identificación de zimodemos de Tripanosoma cruzi mediante análisis de ADN

MONTAMAT E.E.; DURAND S.; BOCCO J.L.; DE LUCA D'ORO G.M.; BLANCO A.

Villa Giardino

Congreso; XV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 1996

Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias

El estudio mediante zimogramas electroforéticos de extractos de T.cruzi aislados de humanos, animales domésticos y selváticos y de vectores procedentes de toda el área endémica de Argentina, permitió reconocer la existencia de 12 cepas isoenzimáticas o zimodemos (Montamat y col. Acta Tropica 50:125,1992 ; De Luca dOro y col. Parasitology 107:405,1993) . Seis de los 12 zimodemos fueron aislados en hospederos humanos y solo 2 (Z1 y Z12) se encuentran con gran frecuencia (en 88% de los casos) y tienen amplia distribución geográfica. Se ha observado una correlación significativa entre zimodemo del parásito infectante y cuadro clínico. El riesgo de compromiso cardíaco es notoriamente mayor en pacientes con Z12 que en aquéllos con Z1 (Montamat y col. Am .J.Trop.Med.Hyg., en prensa) . Por esta razón, la tipificación de la cepa infectante puede ser útil con fines pronósticos. Sin embargo, la metodología utilizada para la clasificación de zimodemos es muy laboriosa e insume mucho tiempo, lo cual reduce las posibilidades de aplicación a la clínica. Teniendo en cuenta la relación demostrada entre zimodemos y patrones de RFLP (esquizodemos) y la clasificación con sondas de ADNc (Macina y col. Molec.Biochem.Parasitol. 25:45,1987), se han efectuado análisis de ADN para tipificar parásitos de los zimodemos más frecuentes en humanos. Se aisló ADN de diferentes stocks de T.cruzi pertenecientes a los zimodemos Z1 y Z12 y se realizaron los siguientes estudios : a) Amplificación de segmentos de ADN mediante PCR utilizando cuatro primers simples con secuencias arbitrarias (RAPDs). La mayoría de los segmentos de ADN amplificados en cada muestra fueron comunes a ambos zimodemos, pero algunos segmentos fueron amplificados sólo en uno de ellos, lo cual permitió su identificación. b) Utilizando primers que franquean la región hipervariable del ADN quinetoplástico de parásitos pertenecientes a Z1 y Z12 se amplificó un segmento de esa región. Esos segmentos fueron utilizados como sondas para caracterizar otros aislamientos. Fragmentos de 270 pb de Z1 y Z12 se purificaron y para eliminar las regiones conservadas fueron digeridos con Sca I y Sau 961 y marcados con alfa 32P-dATP. Previa desnaturalización y transferencia de ADN de diferentes aislamientos Z1 y Z12, se realizaron ensayos de hibridación con las sondas marcadas. Cada una de las sondas Z1 y Z12 hibridaron sólo con aislamientos pertenecientes al mismo zimodemo. Las técnicas mencionadas han demostrado ser efectivas para la caracterización de las principales cepas isoenzimáticas de T.cruzi en Argentina. Se proyecta su aplicación al reconocimiento de parásitos en heces de Triatomas y en sangre de pacientes chagásicos crónicos.