Monitoreo del tratamiento de pacientes con Leucemia Mieloide Crónica detectando la translocación entre el proto-oncogen abl y el gen bcr por la técnica de RT-PCR

DURAND S.; NUÑEZ B.; PATRITO L.; BOCCO J.L.

Iguazú

Congreso; XXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica, IX de la Sociedad Argentina de Neuroquímica y V de la Asociación Argentina de Biología del Desarrollo; 1994

Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica (SAIB)

El cromosoma Philadelphia que se detecta en el 90 % de los pacientes con leucemia mieloide crónica (LMC) se debe a una translocación recíproca entre el cromosoma 9 y 22 en la cual la porción 3´ terminal del proto-oncogen abl se une al extremo 5´ del gen bcr. Esta alteración genética fue la primera en describirse como específicamente vinculada a una neoplasia humana. La fusión de los genes abl-bcr induce activación oncogénica de abl, originando un producto proteico de 210 kDa con una elevada actividad de tirosina-quinasa comparado con la proteína abl normal de 145 kDa. El diagnóstico y control del tratamiento de los pacientes con LMC por métodos bioquímicos, inmunológicos, Southern blot y citogenética resultan poco sensibles como para realizar el seguimiento en la etapa asintomática de la enfermedad y para asegurar una prolongación del período de sobrevida en pacientes bajo tratamiento. Debido a que tanto los transcriptos normales como la fusión de los genes abl-bcr han sido clonados, en la actualidad puede identificarse la lesión genética con una alta sensibilidad y especificidad por medio de la combinación de una reacción de la enzima transcriptasa reversa y la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). Con el objeto de controlar el tratamiento de pacientes con LMC asistidos por la División Oncohematología del Hospital Nacional de Cínicas de la ciudad de Córdoba, se obtuvieron leucocitos de sangre periférica por centrifugación en gradiente de Ficoll-Hypaque ó por sedimentación con dextran. A partir de esas células se purificó RNA total y con la enzima transcriptasa reversa se realizó la síntesis de 1ra cadena de cDNA con un primer específico del transcripto abl, tanto normal como patológico. El cDNA obtenido se utilizó como molde para la reacción de PCR empleando primers específicos tanto para el rearreglo abl-bcr como para abl normal que se utilizó como control positivo. En los casos que fue necesario incrementar la sensibilidad y/o controlar la especificidad de la reacción, sobre el producto amplificado inicialmente se realizó un segundo ensayo de PCR utilizando primers internos ("Nested PCR"). Si bien aún no pueden realizarse cálculos estadísticos, los resultados obtenidos con diez pacientes confirman la importancia de esta metodología en detectar precozmente la presencia de células leucémicas cuando todos los demás parámetros clínicos arrojan resultados normales, como en el caso de la denominada Enfermedad Residual Mínima. Por último, debido a la gran sensibilidad, la técnica podría aplicarse al control de grupos con alto riesgo a desarrollar leucemias a fin de instaurar el tratamiento en ausencia de sintomatología clínica, lo cual tiene una alta probabilidad de reducir considerablemente las consecuencias de la enfermedad.