ESTUDIO IN VITRO DE LA COMBINACION DE ANFOTERICINA-B Y CLOMIPRAMINA SOBRE Leishmania braziliensis

AMELIA E, ; LOZANO E, ; KONIGHEIM B,; AGUILAR JAVIER,; LO PRESTI S, ; BAZAN C, ; STRAUSS M, ; RIVAROLA W

Cordoba

Jornada; XVIII Jornada de Investigación Científica (JIC 2017).; 2017

La Anfotericina-B (ANF), fármaco de uso habitual para el tratamiento de Leishmaniasis, producida por protozoarios del género Leishmania, ejerce suactividad a partir de su unión con el ergosterol de las membranas del parásito, interfiriendo en su permeabilidad con la consiguiente pérdida de iones quelleva a la lisis de su membrana, produciendo la muerte del parásito. Sin bien, este fármaco produce un efecto leishmanicida, a menudo es tóxico para lospacientes. Debido a esto, se propuso la búsqueda de nuevos fármacos que actúen sobre blancos moleculares presentes en el parásito y ausentes en elhuésped. Clomipramina (CLO), un antidepresivo tricíclico, es un potente inhibidor de la tripanotiona reductasa, enzima exclusiva del ordenKinetoplastide. El objetivo del presente trabajo fue analizar el tratamiento combinado in vitro de ANF y CLO sobre promastigotes de L. braziliensis.Realizamos un ensayo de citotoxicidad (MTT) sobre la línea celular Vero, incubando 2,5x105 cel/mL con ANF=25-400μg/mL y CLO=25-1000μg/mL, por4 días, y un ensayo de efecto combinado en el que se incubaron 3x106 promastigotes/mL con ANF=0,002-0,032 μg/mL y CLO=0,3-2 μg/mL.Determinamos los valores de la concentración inhibitoria del 50% (IC50) y evaluamos el efecto de la combinación calculando el Índice de Combinación(CI: CI>1 antagónico; CI=1 aditivo; CI<1 sinérgico) y se graficaron isobologramas con los valores de IC50 de cada una de las drogas y de lascombinaciones. El IC50 de ANF fue de 0,018?g/ml y de CLO 1,098?g/ml sobre promastigotes, siendo 25 y 108 veces menor que la concentracióncitotóxica. Los valores de IC50 sobre la línea celular Vero fueron 0,44?g/ml para ANF y 119?g/ml para CLO. El valor del CI fue de 0,18 indicando unefecto marcadamente sinérgico. En los isobologramas los valores de IC50 de las combinaciones se ubicaron debajo de la línea de aditividad, indicandoun efecto sinérgico entre ANF y CLO, coincidiendo con el resultado obtenido con el índice de combinación. El efecto sinérgico observado seria elresultado de los mecanismos de acción complementarios de ambas drogas, potenciando su efecto letal, produciendo la muerte del parásito a menoresconcentraciones que la monoterapia y sin efectos tóxicos evidentes sobre el huésped.