En este trabajo se estudió la interacción de una secuencia de ADN denominada
G-cuadruplex y el intercador Azure B (AzB). Dicha secuencia posee una estructura
constituida por cuatro hebras paralelas de guaninas, esta estructura tan particular ha
sido identificada en la formación de telómeros y de promotores oncogénicos. Por tal
motivo, la estabilización o inducción de la formación del cuadruplex de guanina se
estudia actualmente como una vía promisoria para limitar el crecimiento de las células
cancerosas. Para los estudios realizados se empleó la secuencia químicamente
modificada con un ciclodecapéptido y una biotina terminal, como se muestra en la
siguiente figura.
La secuencia fue inmovilizada sobre la superficie de
electrodos de oro modificados con ácido 3-mercapto
propanoico. Los grupos carboxílicos del tiol fueron unidos a las
funciones amina de streptavidina (SA) empleando 1-etil-3-(3-
dimetilaminopropil) carbodiimida) (EDC) y N-hidroxisuccinimida
(NHS). La adsorción de G-cuadruplex sobre los electrodos
previamente modificados se basó en la interacción específica
streptavidina/biotina-G-cuadruplex.
Mediante Resonancia de Plasmón Superficial (SPR) “in
situ” se estudiaron: todas las etapas de modificación de los
electrodos, la interacción entre G-quadruplex y AzB, la
regeneración de la superficie post interacción empleando
diferentes protocolos, y la interacción inespecífica entre la
superficie del electrodo y el intercalador, en este caso
siguiendo la interacción entre SA sin G-cuadruplex y AzB.
La interacción G-cuadruplex-AzB fue estudiada
electroquímicamente siguiendo los cambios en la señal de reducción del intercalador a
-0,2 V obtenida por voltamperometría de onda cuadrada o voltamperometría cíclica. Se
realizó un análisis comparativo de la respuesta de AzB sobre oro sin modificar, oro
modificado sólo con SA y oro modificado con G-cuadruplex. Los resultados indican
que AzB interactúa con G-cuadruplex, la adsorción puede ser descripta con una
isoterma tipo Langmuir, en acuerdo con estudios previos realizados por SPR,
alcanzándose la saturación superficial en concentraciones mayores a 3 μM. El
presente trabajo muestra que las técnicas electroquímicas pueden ser empleadas exitosamente en el estudio de este tipo de interacciones obteniéndose resultados comparativos a los de otras técnicas de mayor complejidad.
presente trabajo muestra que las técnicas electroquímicas pueden ser empleadas
exitosamente en el estudio de este tipo de interacciones obteniéndose resultados
comparativos a los de otras técnicas de mayor complejidad.
μM. Elpresente trabajo muestra que las técnicas electroquímicas pueden ser empleadas
exitosamente en el estudio de este tipo de interacciones obteniéndose resultados
comparativos a los de otras técnicas de mayor complejidad.