La dieta rica en lípidos modifica la expresión de receptores tipo Toll, induce cambios del perfil lipídico e insulinemia en un modelo experimental de ateroesclerosis

ANDRADA MC; STOPPA MM; CABRAL MF; CANO RC; AOKI MP

Córdoba

Jornada; 1ras Jornadas Latinoamericanas de la Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba; 2008

SOCIEDAD DE ENDOCRINOLOGÍA Y METABOLISMO DE CORDOBA

LA DIETA RICA EN LÍPIDOS MODIFICA LA EXPRESIÓN DE RECEPTORES TIPO TOLL, INDUCE CAMBIOS DEL PERFIL LIPIDICO E INSULINEMIA EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE ATEROESCLEROSIS

Andrada MC¹, Stroppa MM ¹, Cabral MF¹, Cano RC ^1,2 y Aoki MP ².

¹ Fac. de Ciencias Químicas. Universidad Católica de Córdoba. ² Dpto. de Bioquímica Clínica. CIBICI-CONICET-Universidad Nacional de Córdoba. rcano@fcq.unc.edu.ar , paoki@fcq.unc.edu.ar

Introducción: Dentro de las enfermedades cardiovasculares, la ateroesclerosis y los síndromes coronarios asociados representan la principal causa de morbi-mortalidad en la sociedad occidental (OMS). La ateroesclerosis, una patología compleja, multifactorial y dinámica, es actualmente considerada una inflamación crónica de la pared arterial (Ross, 1999). Recientemente, se ha demostrado la participación de TLR2/4 en el desarrollo de esta patología, usando modelos experimentales doble knockout para estos receptores y para receptor de LDL y apoE (Michelsen, 2004). Numerosos estudios se han llevado a cabo en modelos experimentales usando ratones manipulados genéticamente para la expresión de receptor de LDL y apo E. Sin embargo, son escasos los antecedentes disponibles en modelos murinos fisiológicos inducidos sólo con administración de dieta rica en lípidos.

Objetivo: Nos propusimos desarrollar un modelo experimental de ateroesclerosis en ratones C57BL/6, susceptibles con la finalidad de investigar el posible mecanismo responsable de la inducción de las lesiones ateroescleróticas.

Material y Métodos: Se usaron ratones C57BL/6 ♂ , de 2 meses de edad, divididos al azar en dos grupos: basales (B) alimentados con dieta estándar rata/ratón (3% de lípidos) y grupo dieta (D) que recibió dieta rica en lípidos (13% de lípidos). Los estudios fueron realizados desde el tiempo 0 hasta 12 meses (m), registrándose el peso corporal (PC). Previo ayuno de 12h, se determinaron en plasma, los siguientes parámetros bioquímicos: 1) triglicéridos (TG) y colesterol (Ct) en autoanalizador Hitachi Modular P, 2) lipoproteínas por electroforesis nativa en poliacrilamida, previa coloración de las muestras con Sudán Black, 3) insulinemia basal y glucemia por radioimmunoanálisis y por método enzimático, respectivamente; 4) ácidos grasos libres (AGL) y su perfil de distribución. Para ello, se aislaron por cromatografía en capa fina, se derivatizaron a esteres metílicos y analizaron  por cromatografía en fase gaseosa con detección por ionización de llama. Los AGL se cuantificaron contra una solución de estándares puros. Las muestras se procesaron agregando ácido undecanoico como estándard interno.

Para los estudios histológicos, secciones de corazón e hígado fueron teñidos con hematoxilina eosina. La coloración específica para lípidos se realizó en cortes por congelación coloreados con Sudán IV.

 La expresión proteica de TLR-2 /4 se cuantificó en homogenatos totales de aorta y corazón por Western-blot. También se detectó su expresión por inmunohistoquímica.

 Análisis Estadístico: Los datos se analizaron empleando el test de ANOVA de una vía y como prueba post hoc  el test de Bonferroni. p <0.05 fue considerada estadísticamente significativa.

Resultados: Los ratones del grupo D mostraron un aumento significativo del PC respecto al grupo B durante todo el tratamiento, duplicando su peso a los 12m.  En D 6m, la insulinemia basal aumentó significativamente (p<0.01 vs B) sin cambios en glucemia. Los AGL plasmáticos aumentaron significativamente sólo en los ratones D 12m con caída de la insulina (p<0.001vs D 6m). El porcentaje de AG saturados fue mayor en D7 y 12m vs B. En los grupos D 1 y 3 m se observó un aumento de VLDL con triglicéridos aumentados significativamente (p<0.01 vs B) y disminución de HDL, mientras que, en este mismo grupo a partir de los 6 m, las lipoproteínas mostraron un perfil aterogénico compatible con fenotipo B de LDL y HDL disminuidas. No se observaron cambios significativos en los TG entre los animales D7, 9 y 12m vs B en cambio hubo una tendencia al aumento del Ct.  La expresión de TLR2/4 resultó aumentada en D vs B sólo en aorta por western blot. Por inmunohistoquímica, TLR2 mostró expresión aumentada tanto en hígado como en corazón de animales D. En corazón D7 y 12m, se observó escaso infiltrado inflamatorio; algunas arterias mostraron un endotelio alto e infiltración celular leve, siendo este fenómeno más evidente en D 12m. La esteatosis hepática fue incipiente en D 1m vs B y mostró un aumento progresivo con el tiempo de tratamiento, resultando muy severa y principalmente macrovesicular en los ratones D7 hasta D12m. 

Conclusiones: Los resultados sugieren que ratones del grupo D desarrollan sobrepeso, aumento de insulina basal, un perfil lipídico aterogénico así como también una expresión proteica aumentada de TLR2/4 en hepatocitos asociada a esteatosis severa. Este cluster de factores de riesgo podrían ser compatibles con la inducción de un síndrome metabólico, el que sería responsable de la aterosclerosis incipiente observada en nuestro modelo experimental.