Participación de glucuronoxilomanano de Cryptococcus neoformans en la inducción de DNA hipodiploide en linfocitos de ratas normales”.

L. S. CHIAPELLO, L. CERVI, H. RUBINSTEIN, D. T. MASIH.

Buenos Aires

Congreso; IX CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGÍA; 2001

Asociación Argentina de Microbiología

participacion de glucuronoxilomanano de Cryptococcus neoformans en la inducción de dna hipodiploide en  linfocitos de ratas normales.

 

L. S. Chiapello, L Cervi, H Rubinstein, D.T. Masih

Parasitología y Micología, Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba. Córdoba (5000), Argentina. email: chiapello@bioclin.fcq.unc.edu.ar

 

El polisacárido glucuronoxilomanano (GXM) es el componente mayoritario de la cápsula de C. neoformans y altos niveles de polisacárido capsular circulante se asocian con criptococosis diseminada. Es conocido que GXM tiene propiedades inmunosupresoras y recientemente en nuestro grupo de trabajo observamos que GXM suprime la respuesta proliferativa de esplenocitos de ratas normales a Con A, con producción de IL-10 e IL-4 y disminución en los niveles de IL-2. Sin embargo al bloqueo de la producción de estas citoquinas o el agregado de IL-2 recombinante no restablecía la respuesta blastogénica de los linfocitos.

El objetivo de este trabajo fue estudiar si uno de los mecanismos responsables del fenómeno supresor de la respuesta proliferativa de esplenocitos de ratas normales por GXM es la inducción de apoptosis.

Con este objetivo se determinó el número total de esplenocitos de ratas normales luego de cultivo a 37ºC y 5% de CO₂ , con y sin el agregado de Con A (10 mg/ml) o GXM (50 mg/ml). Las células se contaron usando microscopio óptico, realizando las diluciones adecuadas. Se observó  una disminución en el número de células luego de cultivo en presencia de GXM respecto a los cultivos de células solas (p < 0,04).Con el agregado de Con A se observó una disminución a partir de las 72 h de cultivo (p < 0,0002). Por otra parte, se estudió la población de células T por citometría de flujo, marcando los esplenocitos luego de 96h de cultivo con un anticuerpo anti-TCRab marcado con FITC. Se observó que GXM también disminuía el número de linfocitos T respecto a los controles (p < 0,007 en cultivos sin Con A y p< 0,0001 con Con A). Para investigar si GXM inducía apoptosis en linfocitos,  se incubaron durante 3, 24 y 72 h esplenocitos de ratas normales en ausencia o presencia de GXM. Posteriormente las células se marcaron con ioduro de propidio y se analizó la presencia de un pico sub G₀/G₁ por citometría de flujo. Se observó la aparición de hipodiploidía a partir de las 3h de cultivo en presencia de GXM comparado con las células solas ( p < 0,03) y un pico bien definido a las 24h de cultivo (p < 0,004 respecto a los controles). Cuando se realizó una doble marcación con PI y anti-TCR se observó un 66,5 ± 0,2 % de células T en la región de DNA hipodiploide.

En conclusión, los resultados presentados sugieren que GXM induce apoptosis de células del sistema inmune. La inducción de apoptosis por GXM podría ser un mecanismo de patogénesis de C. neoformans para su diseminación en el huésped.