Efectos inmunomodulatorios de M. canis sobre células epidérmicas murinas

BURSTEIN VL; MASIH DT; CHIAPELLO L S

Los Cocos. Córdoba

Jornada; LXI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI).; 2013

Sociedad Argentina de Inmunología

Las células de Langerhans (LC) son las únicas células dendríticas de la epidermis (MHC-II+), representando entre 1 y 5% de la población total de las células epidérmicas. Estas células pueden inducir una respuesta adaptativa protectiva o tolerogénica dependiendo del patógeno. Microsporum canis es un hongo dermatofito queratinofílico que infecta la epidermis causando micosis cutáneas. Actualmente se desconocen los efectos de los dermatofitos sobre la activación de las células dendríticas de la piel y su impacto en la inmunidad específica antifúngica. El objetivo de este trabajo fue estudiar in vitro los efectos de M. canis sobre la activación de las células epidérmicas y evaluar distintos métodos de obtención y purificación de LC murinas. Se estudiaron distintas fuentes de células epidérmicas de orejas de ratones BALB/c: una suspensión de células epidérmicas totales (CEpT, obtenidas por digestión enzimática) y células epidérmicas migrantes (CEpM) obtenidas del cultivo de la hoja entera de epidermis. El análisis por citometría de flujo de las CEpT demostró un 2,2 ± 0,3 % células MHC-II+. Luego de 24 hs de cultivo, se observó que M. canis (suspensión de hifas de DO: 0,508 ± 0,002, equivalente a 1110 ± 101 UFC) no modifica la expresión de MHC-II e induce un aumento significativo de IL-6 (p<0,05) y una disminución de IL-10 (p<0,004) en las CEpT (5x105/well/300l). Por otra parte, se realizaron cultivos de hojas de epidermis enteras, en ausencia o presencia de GM-CSF y/o M. canis. Luego de 3 días de cultivo, las CEpM en medio solo mostraron un 6 % de células MHC-II+, siendo un 2,4 % MHC-IIhi. Tanto el agregado de GM-CSF como de hifas de M. canis incrementaron significativamente el porcentaje (p < 0.00006 y p < 0.0006, respectivamente) e intensidad de fluorescencia media (p < 0.01 y p < 0.003, respectivamente) de las células MHC-IIhi respecto a los controles. Además, M. canis indujo un aumento en la producción de IL-6, respecto a los controles. Finalmente, la purificación de LC con perlas inmunomagnéticas (Miltenyi) mostró un 67,7 ± 1,9% de células MHC-II+ con una viabilidad del 70 % y un rendimiento del 2%, aproximadamente. Por otra parte, la purificación de LC utilizando cell sorting con un anticuerpo anti MHC-II demostró un 75% de células MHC-II+ con una viabilidad del 50% y un rendimiento del 5%, aproximadamente. Por lo tanto, este trabajo sienta las bases para estudiar la activación de LC por M. canis en el contexto de la epidermis y directamente sobre las LC purificadas