Inducción de Protección Durante
JL Baronetti, LS Chiapello, MP Aoki, HR Rubinstein, DT Masih.
Micología y Parasitología, Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba, CP 5000,Córdoba, Argentina
En las infecciones humanas y experimentales con Cryptococcus neoformans se ha demostrado que la respuesta inmune mediada por células, particularmente la inducción de un perfil Th1 con la activación clásica de macrófagos, constituyen mecanismos centrales en el control de la diseminación fúngica. El objetivo de este trabajo fue investigar el potencial de levaduras poco capsuladas de C. neoformans muertas por calor (LMC) y del polisacárido capsular purificado (PSC), para inducir protección durante la infección experimental en ratas.
Con este propósito ratas Wistar de 3 meses fueron inmunizadas por vía subcutánea con LMC (4 x 107) o PSC (0,4 mg) emulsionados con adyuvante de Freund completo (AFC), en una sola dosis. Cuatro días después de la inmunización los animales fueron infectados intraperitonealmente con 1 x 107 levaduras de C. neoformans var neoformans y a los 21 días post-infección se investigó: las unidades formadoras de colonias, alteraciones histológicas y depósitos tisulares (inmunohistoquímica) del polisacárido liberado durante la infección en bazo, pulmón e hígado. Se evaluaron los niveles séricos del antígeno capsular (aglutinación al látex). Se determinó además la respuesta proliferativa específica de células de bazo por incorporación de timidina tritiada y la producción de citoquinas por linfocitos CD4 y CD8, mediante doble marcación con anticuerpos para antígenos de superficie y citoquinas intracelulares, realizando el análisis por citometría de flujo. Se estudió la capacidad microbicida de macrófagos peritoneales midiendo su actividad fungicida y la producción de óxido nítrico (ON) por la reacción de Griess.
Los resultados revelaron que las ratas inmunizadas con LMC/AFC e infectadas mostraban una disminución en la carga fúngica, conservación de la histología normal, reducción de los títulos séricos y depósitos tisulares del antígeno capsular, respecto a los animales solamente infectados. Además, la inmunización con LMC/AFC indujo un incremento en la proliferación específica de células de bazo, en la producción de INFg por linfocitos CD4 y mejoró la capacidad fungicida y síntesis de ON por células peritoneales, respecto a los animales sólo infectados. En contraste, la inmunización con PSC/AFC exacerbó los efectos de la infección criptocóccica, aumentando la carga fúngica y los niveles de polisacárido en suero y tejidos. Los animales tratados con PSC/AFC e infectados mostraron además un incremento en la síntesis de IL-10 (citoquina inmunosupresora) por células CD4.
En conclusión, los resultados demuestran que la inmunización de ratas con LMC/ AFC induce un perfil de respuesta Th1 y mejora la función de macrófagos, confiriendo niveles significativos de protección contra la infección con C. neoformans.
