Desarrollo de modelos artificiales para el estudio de derivados anfifílicos de ácido L-ascórbico que interaccionan con membranas mitocondriales

GERARDO H. CARRO; FANANI, M. LAURA

Virtual

Congreso; XLIX Reunión Annual SAB; 2021

SOCIEDADA ARGENTINA DE BIOFÍSICA

Los derivados anfifílicos de ácido ascórbico (ASCn), como el palmitato de ascorbilo, miristato de ascorbilo y laurato de ascorbilo, son compuestos que han demostrado una prometedora actividad anticancerígena. Dado que el mecanismo de acción de los ASCn se encuentra poco dilucidado, una de las hipótesis preliminares es que los mismos actúan desacoplando el gradiente de pH mitocondrial. Es por esto, que nos propusimos estudiar el mecanismo de acción de los ASCn utilizando liposomas como modelos de mitocondrias. Para esto, hemos generado vesículas unilamelares gigantes (GUVs), por medio de electroformación. Las GUVS contenían POPC o la mezcla que asemeja la composición de la membrana interna de mitocondria (PC/PE/PI/Cardiolipina/Colesterol, 46:30:7:7:10), a las cuales se le agregó un fluorescente de membranas y un lípido biotinilado para anclarlas al fondo del pocillo. Estas vesículas encapsulan piranina a pH 8, la cual es una sonda fluorescente que presenta diferentes máximos de absorción en función del pH. Una vez obtenidas las GUVs, las mismas fueron diluidas en buffer citrato pH 6, de forma de imitar el gradiente de pH presente a ambos lados de la membrana interna mitocondrial. Finalmente, las GUVs fueron expuestas a los diferentes ASCn y a carbonilcianuro-p-trifluorometoxifenilhidrazona (FCCP), compuesto conocido por desacoplar el gradiente de pH mitocondrial. El cambio de pH intravesicular causado por estos compuestos fue monitoreado por medio de microscopia confocal de fluorescencia, y posteriormente, determinando la relación de la intensidad relativa de absorción de fluorescencia a 450 nm y 400 nm de piranina, los cuales corresponden a los máximos de absorción a pH 8 y pH 6 respectivamente de piranina, fijando la emisión a 510 nm. Con el desarrollo de esta técnica esperamos diferenciar el mecanismo de acción de los ASCn sobre la membrana interna mitocondrial, discriminando una acción de disipación de pH de una permeabilización general o lisis de la membrana. Este trabajo fue financiado por SecyT-UNC y FONCyT PICT 2017-0332 y PICT 2019-02331. MLF es Profesora Titular UNC e Investigadora Principal de CONICET. GC es estudiante de grado FCQ-UNC.