En estudios previos informamos que la hormona de crecimiento (GH) y el factor de crecimiento insulino-símil tipo I (IGF-I) redujeron respuestas metabólicas T3-dependientes en la rata a través de una disminución de la expresión de los receptores nucleares de las hormonas tiroideas (TR). El crecimiento somático post-natal depende primariamente de factores hormonales como GH, IGF-I y T3. En los desórdenes de crecimiento, GH o IGF-I son administrados para corregir la talla adulta final. Sin embargo, la respuesta al tratamiento con GH o IGF-I en algunos pacientes es menor a la esperada. De acuerdo a nuestros resultados previos realizados en ratas, sería posible que dicha falla pudiera ser debida, al menos en parte, a una reducción de la expresión de TR en células óseas de estos pacientes luego del tratamiento con GH o IGF-I y en consecuencia una menor respuesta metabólica T3-específica en los tejidos, entre ellos, el tejido óseo. En pacientes con Síndrome de Turner (TS), el tratamiento con GH mejora la talla final, aunque algunos de ellos responden de manera reducida al tratamiento. Los TR se expresan en células mononucleares de sangre periférica (PBMC), aunque en muy bajos niveles. Dada la accesibilidad de la obtención de muestras de sangre, el estudio de la expresión del mRNA TR en PBMC de pacientes bajo tratamiento con GH o IGF-I, podría llegar a ser una herramienta para el seguimiento y predicción del éxito de la terapia instaurada. Sin embargo, los métodos desarrollados hasta el momento para dicha evaluación incluyen la determinación radio-isotópica de los productos de RT-PCR obtenidos luego de amplificar el mRNA TR por RT-PCR semi-cuantitativa o la realización de PCR en tiempo real (Real-Time PCR), el cual emplea costoso equipamiento e insumos, no accesibles a laboratorios de rutina clínica.Los objetivos del presente trabajo fueron: 1) desarrollar una metodología para la determinación semi-cuantitativa de mRNA TR en PBMC que no incluya el empleo de material radioactivo ni alta tecnología, a fin de poder ser desarrollada en laboratorios clínicos de nuestro medio; 2) evaluar los niveles de mRNA TR en pacientes tratados con GH, para lo cual se utilizaron pacientes con TS, tratados o no con GH y ambos grupos comparados con pacientes normales. PBMC fue purificada de pacientes de 5-15 años (10 normales, 10 TS bajo tratamiento con GH (0.33 mg/kg/ semana) por al menos 6 meses y 10 TS no tratadas), con Ficoll-hypaque y el RNA total fue extraído con Trizol. El mRNA TR y mRNA GADPH (para normalizar), fueron determinados en paralelo por RT-PCR. Los productos de PCR fueron resueltos en agarosa 2%, visualizados con bromuro de etidio y densitométricamente escaneados. Resultados: 1) Pudo ser desarrollado un método confiable, no-radioactivo para la semi-cuantificación de mRNA TR en PBMC. 2) Los niveles de mRNA TR de pacientes con TS bajo tratamiento con GH estuvieron significativamente reducidos con respecto al control y a TS sin tratamiento (p<0.01, ANOVA, Student-Neuman-Keuls). No se obtuvieron diferencias significativas entre pacientes normales y TS no-tratadas. En conclusión, los resultados obtenidos indican que pudo ser desarrolada una metodología para la determinación de mRNA TR que por sus características puede ser implementada en laboratorios clínicos. Por su parte, en el modelo experimental utilizado pudo observarse que las pacientes con TS bajo tratamiento con GH mostraron una reducción de los niveles de mRNA TR en PBMC. Este hallazgo podría llegar a explicar la falta de respuesta adecuada al tratamiento con GH en un grupo de pacientes, ya que la reducción en los niveles de mRNA TR podría indicar una reducción del nivel de expresión también en células óseas, conduciendo a una menor respuesta T3-específica a este nivel. Actualmente estamos realizando estudios similares para evaluar el impacto del tratamiento con GH o IGF-I sobre los niveles de mRNA TR en PBMC en pacientes con diversas patologías y evaluando diversas respuestas metabólicas titulares T3-dependientes en estos pacientes.
