Transporte y Metabolismo de Hormonas Tiroideas en Células Dendríticas: expresión de genes involucrados.

GIGENA N; ALAMINO VA; MONTESINOS, MM; NAZAR, M; MASINI-REPISO AM; CREMASCHI, G; PELLIZAS CG

Córdoba

Jornada; XIV Jornadas Ciéntíficas Anuales de la Sociedad de Endocrinología de Córdoba (SEMCO).; 2012

Sociedad de Endocrinología de Córdoba (SEMCO).

Transporte y Metabolismo de Hormonas Tiroideas en Células Dendríticas: expresión de genes involucrados. Nicolás Gigena*, Vanina A. Alamino*, María M. Montesinos*, Magalí Nazar*, Ana M. Masini-Repiso*, Graciela Cremaschi# y Claudia G. Pellizas*. *Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI-CONICET), Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba. #Laboratorio de Neuroinmunomodulación y Oncología Molecular. Instituto de Investigaciones Biomédicas (BIOMED-CONICET). Universidad Católica Argentina (UCA), Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Introducción y Objetivos: Los sistemas neuroendócrino e inmune operan de una manera bidireccional, en la cual hormonas y citoquinas representan los principales efectores de esta compleja interrelación. Las células dendríticas (DC) son células presentadoras de antígeno altamente especializadas que reconocen, procesan y presentan antígenos a linfocitos T (Li T) vírgenes para inducir respuestas inmunes antígeno (Ag)-específicas. Las DC pueden ser obtenidas en el laboratorio a partir de médula ósea de ratón (DC inmaduras–DCi) y maduradas (DCm) con lipopolisacárido (LPS). Las DCi poseen capacidad de captar y procesar Ag, a diferencia de las DCm que son capaces de liberar grandes cantidades de citoquinas, adquiriendo la capacidad de estimular a los Li T. En nuestro laboratorio demostramos que DC murinas expresan el receptor de hormonas tiroideas (HT) beta 1 (TRβ1) y que niveles fisiológicos de triiodotironina (T3) estimulan la maduración de DCi y potencian su capacidad de estimular Li T, conduciendo a una respuesta de citoquinas tipo Th1 (Mascanfroni y col. FASEB J 2008, 22:1032). Estos efectos fueron ejercidos por T3 a través de una vía AKT y NF-kB dependiente (Mascanfroni y col. J Biol Chem 2010, 285: 9569). A su vez demostramos que los glucocorticoides son capaces de contrarrestar los efectos inmunoestimuladores de T3 en DC y de abolir su capacidad de polarizar la respuesta inmune adaptativa hacia un perfil Th1 (Montesinos y col. Steroids 2012, 77: 67). Sin embargo, los mecanismos moleculares involucrados en el transporte y metabolismo de las HT en DC son desconocidos. Los objetivos de este trabajo fueron explorar: 1) la expresión de los 3 Transportadores de HT de mayor especificidad: Transportador de Monocarboxilatos 8 (MCT-8), MCT-10 y Transportador de Aniones y Polipéptidos Orgánicos 1C1 (OATP1C1) en DC; 2) la expresión de Deiodinasas de Iodotironinas en DC: DIO 1, 2 y 3, en diferentes estadíos de maduración de DC, como así también estudiar el potencial efecto de T3 sobre dicha expresión. Materiales y Métodos: DCi fueron obtenidas de progenitores de médula ósea de ratones C57BL/6 y cultivadas en medio de cultivo RPMI 1640, en presencia de suero fetal bovino (10%) y factor estimulante de colonias macrocíticas-granulocíticas (GM-CSF). Al cabo de 8 días, más de 85% de las células expresan el marcador de superficie de DC: CD11c. Las DCi fueron maduradas con T3 (10 nM) o LPS (100 ng/ml) durante 18 hs. La presencia y los niveles de ARNm de los genes de interés mencionados precedentemente fue evaluada semi-cuantitativamente a través de RT-PCR Convencional. Por su parte, mediante qRT-PCR en tiempo real (SYBR GREEN) se determinó la expresión relativa del ARNm de cada gen. La identidad de los genes de interés fue confirmada mediante Nested RT-PCR o secuenciamiento genético. Resultados: 1) se evaluó la expresión de los 3 principales transportadores de HT (MCT-8, MCT-10 y OATP1C1). Los resultados mostraron que: A. DC expresan solamente ARNm de MCT-10, sugiriendo que la proteína que codifica funcionaría como transportador de HT facilitando su ingreso a la célula; B. la expresión del ARNm de MCT-10 en DCi es menor que en DCm maduradas con estímulos como LPS y T3. 2) A. se evaluó la expresión de DIO 1, 2 y 3 en DC. Se evidenció la presencia de ARNm tanto de Dio2 como de Dio3 en DCi, no así de Dio1; B. niveles fisiológicos de T3 regulan la expresión de DIO3 a nivel transcripcional incrementando los niveles de su ARNm. Discusión y Conclusiones: Los efectos de T3 sobre la maduración y la función de las DC fueron oportunamente reportados por nuestro laboratorio. Pero la manera en que T3 ingresa a la DC y la forma en la que sus niveles intracelulares son controlados, aun no habían sido exploradas. En este trabajo demostramos la presencia de ARNm-MCT-10, sugiriendo que la proteína que codifica funcionaría como transportador de HT en DC. Por su parte, observamos expresión de ARNm-DIO2 y DIO3 en DCi pero no de DIO1, sugiriendo que DIO 2 y 3 participarían en la activación-inactivación de HT en el interior de las DC. En adición, demostramos que la HT activa: T3, participa de la regulación de la expresión de DIO 3 a nivel transcripcional. Nuestros hallazgos proveen por primera vez evidencia de la presencia de los genes que están involucrados en el transporte y metabolismo de las HT en DC, eventos críticos para un adecuado mecanismo de acción de las mismas en esta célula blanco, como ya fuera demostrado en nuestro laboratorio.