El óxido nítrico inhibe la expresión de la peroxidasa tiroidea inducida por TSH involucrando al factor de transcripción tiroideo 2

MONTESINOS, MM; NICOLA JP; LUCERO AM; PEYRET V; NAZAR, M; PELLIZAS CG; MASINI-REPISO AM

Córdoba

Congreso; X Congreso Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología (FASEN); 2014

Sociedad Argentina de Endocrinología y Metabolismo y Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología

La biosíntesis de hormonas tiroideas (HT) comprende el transporte de ioduro hacia el interior de la célula folicular, la incorporación (organificación) de ioduro a los residuos tirosina de la molécula de tiroglobulina (TG) y su posterior acoplamiento. El primer paso para la organificación del ioduro consiste en su oxidación, catalizada por la enzima peroxidasa tiroidea (TPO). La expresión de TPO en la glándula tiroides es regulada principalmente por tirotrofina (TSH) e involucra la presencia en el promotor de sitios de unión para distintos factores de transcripción, fundamentalmente el factor tiroideo 2 (TTF-2). Por otra parte, se ha propuesto al óxido nítrico (NO) como un posible factor autocrino y paracrino involucrado en la regulación tiroidea. La generación endógena de NO es catalizada por la enzima NO-sintasa (NOS). Ha sido evidenciado un incremento en la expresión de NOS durante la formación de bocio, en carcinoma tiroideo papilar y en enfermedades autoinmunes. Diversos estudios demostraron alteraciones morfológicas y funcionales en la célula folicular tiroidea por efecto de NO. En este sentido, se observó un efecto inhibitorio de NO sobre la captación de ioduro y la expresión de ARNm de TG, transportador sodio-ioduro (NIS) y TPO inducidas por TSH en la línea funcional normal tiroidea de rata FRTL-5. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el mecanismo molecular involucrado en la acción de NO sobre la expresión de TPO. A tal fin, células FRTL-5 fueron incubadas con TSH (0,5 mUI/ml) y/o donores de NO: nitroprusiato de sodio (NPS) y S-nitroglutatión (GSNO) a distintas concentraciones (50-300 µM) y se evaluaron: 1- Expresión de TPO: ARNm (RT-qPCR) y proteína (Western blot); 2- Actividad transcripcional del promotor de TPO; 3- Unión de TTF-2 al promotor de TPO (inmunoprecipitación de la cromatina); 4- Expresión de TTF-2: ARNm (RT-qPCR) y proteína (Western blot); 5- Actividad transcripcional del promotor de TTF-2. Estadística: ANOVA, Student-Newman-Keuls. Los resultados indicaron que SNP y GSNO disminuyeron la expresión de TPO dependiente de TSH tanto a nivel de ARNm como de proteína en forma dosis-dependiente (p<0.001). Ambos donores de NO inhibieron el incremento en la actividad transcripcional del promotor de TPO inducida por TSH (p<0.01), de manera dependiente de AMPc (p<0.01) a través de la vía guanilato ciclasa. Además, el análisis de diferentes constructos con mutaciones en sitios de unión para los factores de transcripción en el promotor de TPO, indicó la participación de TTF-2 en el efecto de los donores de NO sobre la expresión de TPO. El tratamiento de las células con ambos donores disminuyó la unión de TTF-2 al sitio consenso en el promotor de TPO in vivo inducida por TSH. La expresión de TTF-2 fue inducida por TSH; sin embargo la presencia de SNP y GSNO disminuyó los niveles de ARNm y proteína de TTF-2 en forma dosis-dependiente (p<0.05), actuando a nivel transcripcional (p<0.05). Estos resultados permitieron profundizar en el mecanismo molecular responsable de la disminución de la expresión de TPO por efecto de NO. El análisis de la actividad funcional del promotor de TPO permitió inferir que la inhibición inducida por NO sobre la expresión de TPO sería mediada, al menos en parte, por una reducción de la actividad transcripcional del gen de TPO, participando el sitio de interacción con TTF-2. La menor disponibilidad de TTF-2 para su unión al promotor de TPO, sería responsable de la menor actividad transcripcional inducida por NO. El esclarecimiento del mecanismo que controla la expresión de genes en la célula tiroidea presenta implicancias no solo en el entendimiento de los mecanismos regulatorios que afectan la biosíntesis de HT, sino también en permitir anticipar cambios funcionales tiroideos asociados a variaciones en el nivel de NO que acompañen a cuadros patológicos.