AIASSA VIRGINIA
Congresos y reuniones científicas
Título:
Acción de antimicrobianos en células de biofilm de Proteus mirabilis
Autor/es:
V. AIASSA, A.I. BARNES, I. ALBESA
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; I Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos; 2005
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
La producción de biofilm condiciona a las bacterias a numerosos cambios
pudiendo observarse una distribución no homogénea de las células
bacterianas en la trama del biofilm. Las células de biofilm sufren cambios
metabólicos que le permiten evadir los mecanismos de defensa del huésped y
ser menos afectadas por la acción de diferentes antimicrobianos. El género
Proteus comprende bacilos Gram negativos caracterizados por producir
swarming y frecuentemente reconocidos como agentes causales de patología
infecciosa relacionada a pacientes con hipertrofia de próstata y lesiones de
riñón que requieren sonda vesical por tiempos prolongados. Objetivos:
investigar la susceptibilidad de cepas de Proteus mirábilis en biofilm frente a
Cirpofloxacina (Cip) y a Imipenem (Imp) comparada con la sensibilidad que
presentan en estado libre o planctónico. Materiales y métodos: Se estudiaron
dos cepas de P.mirabilis 1A y 2A de origen clínico. Se usaron membranas
filtrantes Millipore (diámetro 25 mm, tamaño del poro, 0,2 um) esterilizadas en
autoclave. Las membranas fueron inoculadas con 0,5 ml de un cultivo
nocturno diluido a 0,200 (densidad óptica 600 nm) y se cultivaron en Agar
Tripteina Soya (ATS) , transfiriendo las membranas a placas nuevas de ATS
cada 24 horas, por 48 horas. Los biofilm fueron expuestos a placas de Agar
Mueller Hinton (AMH) conteniendo Imp: 160 ug/ml (10 CIM) y Cip: 40 ug/ml
(10 CIM), durante 2, 4 y 24 horas. Las células planctónicas fueron cultivadas
en Caldo Müeller Hinton con las mismas concentraciones de antibióticos y
tiempos descriptos. Se determinaron las unidades formadoras de colonias por
ml (UFC/ml) a los tiempos preestablecidos por siembra en ATS y se
expresaron los resultados como logaritmo de UFC/ml. En los biofilm se evaluó
la degradación de los antibióticos a concentraciones 2 y 10 CIM mediante un
nuevo bioensayo con Eschearicha coli. Resultados: Los biofilm de ambas
cepas mostraron frente a Imp muy poca variación del log de UFC/ml a las 2 y
4 horas de exposición, la cepa A2 evidenció una caída de 1,61 unidades de
log UFC/ml frente a Imp. Frente a Cip se observó una disminución menor a 1
unidad de log de UFC/ml en los biofilm de las 2 cepas a las 24 horas mientras
que los recuentos bacterianos de las células plantónicas expuestas 24 horas a
ambos antibióticos fueron negativos. Ambas cepas (A1 y A2) no presentaron
desarrollo de E. coli en la zona de AMH donde se formó el biofilm indicando
que la actividad antibiótica a 10 CIM y a 2 CIM no sufrió cambio significativo.
Conclusiones: El biofilm afecta marcadamente la sensibilidad de las células a
los antibióticos estudiados durante un tiempo de exposición prolongado
(24horas). No se observó degradación de los antibióticos a concentraciones
supra CIM por las células de biofilm de las dos cepas estudiadas.
pudiendo observarse una distribución no homogénea de las células
bacterianas en la trama del biofilm. Las células de biofilm sufren cambios
metabólicos que le permiten evadir los mecanismos de defensa del huésped y
ser menos afectadas por la acción de diferentes antimicrobianos. El género
Proteus comprende bacilos Gram negativos caracterizados por producir
swarming y frecuentemente reconocidos como agentes causales de patología
infecciosa relacionada a pacientes con hipertrofia de próstata y lesiones de
riñón que requieren sonda vesical por tiempos prolongados. Objetivos:
investigar la susceptibilidad de cepas de Proteus mirábilis en biofilm frente a
Cirpofloxacina (Cip) y a Imipenem (Imp) comparada con la sensibilidad que
presentan en estado libre o planctónico. Materiales y métodos: Se estudiaron
dos cepas de P.mirabilis 1A y 2A de origen clínico. Se usaron membranas
filtrantes Millipore (diámetro 25 mm, tamaño del poro, 0,2 um) esterilizadas en
autoclave. Las membranas fueron inoculadas con 0,5 ml de un cultivo
nocturno diluido a 0,200 (densidad óptica 600 nm) y se cultivaron en Agar
Tripteina Soya (ATS) , transfiriendo las membranas a placas nuevas de ATS
cada 24 horas, por 48 horas. Los biofilm fueron expuestos a placas de Agar
Mueller Hinton (AMH) conteniendo Imp: 160 ug/ml (10 CIM) y Cip: 40 ug/ml
(10 CIM), durante 2, 4 y 24 horas. Las células planctónicas fueron cultivadas
en Caldo Müeller Hinton con las mismas concentraciones de antibióticos y
tiempos descriptos. Se determinaron las unidades formadoras de colonias por
ml (UFC/ml) a los tiempos preestablecidos por siembra en ATS y se
expresaron los resultados como logaritmo de UFC/ml. En los biofilm se evaluó
la degradación de los antibióticos a concentraciones 2 y 10 CIM mediante un
nuevo bioensayo con Eschearicha coli. Resultados: Los biofilm de ambas
cepas mostraron frente a Imp muy poca variación del log de UFC/ml a las 2 y
4 horas de exposición, la cepa A2 evidenció una caída de 1,61 unidades de
log UFC/ml frente a Imp. Frente a Cip se observó una disminución menor a 1
unidad de log de UFC/ml en los biofilm de las 2 cepas a las 24 horas mientras
que los recuentos bacterianos de las células plantónicas expuestas 24 horas a
ambos antibióticos fueron negativos. Ambas cepas (A1 y A2) no presentaron
desarrollo de E. coli en la zona de AMH donde se formó el biofilm indicando
que la actividad antibiótica a 10 CIM y a 2 CIM no sufrió cambio significativo.
Conclusiones: El biofilm afecta marcadamente la sensibilidad de las células a
los antibióticos estudiados durante un tiempo de exposición prolongado
(24horas). No se observó degradación de los antibióticos a concentraciones
supra CIM por las células de biofilm de las dos cepas estudiadas.
