AIASSA VIRGINIA
Congresos y reuniones científicas
Título:
Susceptibilidad a peróxido de hidrógeno aumentada en cepas resistentes a ciprofloxacina
Autor/es:
V. AIASSA, A. I. BARNES, I. ALBESA
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; II Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos; 2009
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
El uso de desinfectantes está incluido en las buenas prácticas de tipo industrial y
hospitalario. En los nosocomios es necesario controlar la carga microbiana,
evitando la diseminación de cepas resistentes a los antimicrobianos de uso más
frecuente, tales como la ciprofloxacina (CIP). Por tal motivo se investigó la
efectividad del peróxido de hidrógeno (H2O2) para eliminar Proteus mirabilis, ya
que es una bacteria que posee una poderosa capacidad antioxidante articulada
por vías enzimáticas y no enzimáticas. Catalasa (CAT) es la enzima encargada
de la descomposición del H2O2 en agua y oxígeno, que puede estar disminuida
cuando está incrementada la superóxido dismutasa (SOD), quien consume el
anión superóxido. Además, en los últimos años se ha visto que CIP causa estrés
oxidativo en bacterias, conduciendo al aumento de especies reactivas del
oxígeno (ROS), con la consiguiente inducción del incremento de SOD. Por ello se
planteó como objetivo investigar la respuesta al H2O2 exógeno en cepas de P.
mirabilis resistentes a CIP en relación con la actividad CAT y SOD que presentan
estas variantes resistentes (VR).
Inducción de resistencia a CIP: Se trabajó con dos cepas “wt” de P. mirabilis
sensibles (1 y 2) a partir de las cuales se seleccionaron las VR (1X, 1Y, 2X y 2y)
mediante pasajes sucesivos en concentraciones subinhibitorias del
antimicrobiano (0,0625 μg/ml) y reaislamiento en Agar Müeller Hinton con
concentraciones superiores a la CIM de CIP (4 CIM y 6 CIM).
Determinación de la actividad CAT: Se incubó una suspensión bacteriana con
H2O2 por 2 h a 37ºC, se adicionó ácido acético (inhibidor de la actividad CAT) y
dicromato de potasio que reaccionó con el H2O2 dando un precipitado de ácido
percrómico, el que se disolvió a 100°C y se valoró a 570 nm.
Sensibilidad al H2O2: Se distribuyó 100μl de una suspensión bacteriana de DO600
0,4 en placas de CLDE, se colocaron discos de papel Whatman N°1
impregnados con 10 μl de H2O2 30% (v/v) por triplicado. Se incubó 24 h a 37°C y
se midieron los halos de inhibición alrededor del disco.
Actividad SOD: Se ensayó por la técnica de irradiación en presencia de
riboflavina, metionina y NBT en cultivos de 24h, por espectrofotometría a 540mm.
Los resultados mostraron un aumento de la sensibilidad al H2O2 en todas las VR,
siendo este incremento significativo en las VR derivadas de la cepa 2. En
condiciones basales se evidenció menor actividad CAT en las VR, siendo la
diferencia respecto a la “wt” significativa en las VR que mostraron mayor
sensibilidad al H2O2 mientras que la actividad SOD fue mayor en las VR.
Los resultados obtenidos destacan la importancia de utilizar H2O2 en la
desinfección de cepas resistentes a CIP, ya que existe correlación entre mayor
susceptibilidad a H2O2, menor actividad CAT, mayor SOD y mayor resistencia a
CIP.
hospitalario. En los nosocomios es necesario controlar la carga microbiana,
evitando la diseminación de cepas resistentes a los antimicrobianos de uso más
frecuente, tales como la ciprofloxacina (CIP). Por tal motivo se investigó la
efectividad del peróxido de hidrógeno (H2O2) para eliminar Proteus mirabilis, ya
que es una bacteria que posee una poderosa capacidad antioxidante articulada
por vías enzimáticas y no enzimáticas. Catalasa (CAT) es la enzima encargada
de la descomposición del H2O2 en agua y oxígeno, que puede estar disminuida
cuando está incrementada la superóxido dismutasa (SOD), quien consume el
anión superóxido. Además, en los últimos años se ha visto que CIP causa estrés
oxidativo en bacterias, conduciendo al aumento de especies reactivas del
oxígeno (ROS), con la consiguiente inducción del incremento de SOD. Por ello se
planteó como objetivo investigar la respuesta al H2O2 exógeno en cepas de P.
mirabilis resistentes a CIP en relación con la actividad CAT y SOD que presentan
estas variantes resistentes (VR).
Inducción de resistencia a CIP: Se trabajó con dos cepas “wt” de P. mirabilis
sensibles (1 y 2) a partir de las cuales se seleccionaron las VR (1X, 1Y, 2X y 2y)
mediante pasajes sucesivos en concentraciones subinhibitorias del
antimicrobiano (0,0625 μg/ml) y reaislamiento en Agar Müeller Hinton con
concentraciones superiores a la CIM de CIP (4 CIM y 6 CIM).
Determinación de la actividad CAT: Se incubó una suspensión bacteriana con
H2O2 por 2 h a 37ºC, se adicionó ácido acético (inhibidor de la actividad CAT) y
dicromato de potasio que reaccionó con el H2O2 dando un precipitado de ácido
percrómico, el que se disolvió a 100°C y se valoró a 570 nm.
Sensibilidad al H2O2: Se distribuyó 100μl de una suspensión bacteriana de DO600
0,4 en placas de CLDE, se colocaron discos de papel Whatman N°1
impregnados con 10 μl de H2O2 30% (v/v) por triplicado. Se incubó 24 h a 37°C y
se midieron los halos de inhibición alrededor del disco.
Actividad SOD: Se ensayó por la técnica de irradiación en presencia de
riboflavina, metionina y NBT en cultivos de 24h, por espectrofotometría a 540mm.
Los resultados mostraron un aumento de la sensibilidad al H2O2 en todas las VR,
siendo este incremento significativo en las VR derivadas de la cepa 2. En
condiciones basales se evidenció menor actividad CAT en las VR, siendo la
diferencia respecto a la “wt” significativa en las VR que mostraron mayor
sensibilidad al H2O2 mientras que la actividad SOD fue mayor en las VR.
Los resultados obtenidos destacan la importancia de utilizar H2O2 en la
desinfección de cepas resistentes a CIP, ya que existe correlación entre mayor
susceptibilidad a H2O2, menor actividad CAT, mayor SOD y mayor resistencia a
CIP.
