Niveles de estrés nitrosativo en pacientes con sindrome urémico hemolítico.

AIASSA V, ALBRECHT C, ALBESA I, ERASO AJ

Córdoba

Congreso; XII Congreso SADI 2012; 2012

Sociedad Argentina de Infectología

ANTECEDENTES: La S-nitrosilación de proteínas es una modificación post translacional redox; de modo tal que su regulación es crucial para mantener una fisiología normal. Hay evidencias en número creciente de enfermedades asociadas con la desregulación de la S-nitrosilación. Son múltiples las funciones que requieren de nitrosilación y denitrosilación coordinadas para mantener la homeostasis de proteínas S-nitrosiladas y la adecuada regulación la transducción de señales celulares. El oxido nítrico participa en la transducción de señales celulares a través de la S-nitrosilación de cisteína de los grupos tioles de las proteínas formando S-nitroso-proteínas las que afectan un amplio rango de actividades enzimáticas, localizaciones subcelulares, interacciones entre proteínas y la estabilidad de las proteínas. Una patología infecciosa que se ha encontrado relacionada con el estrés oxidativo y nitrosativo es el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH), el que preocupa por sus secuelas y aumento de incidencia en nuestro país. Si bien se ha avanzado mucho sobre el conocimiento del daño causado por la toxina shiga (Stx) de Escherichia coli, el estrés oxidativo y nitrosativo que ésta juntamente con la hemolisina (Hly) generan en sangre de pacientes con SUH requiere ser investigado a nivel de proteínas. OBJETIVO: Investigar si el estrés oxidativo generado por Stx y Hly a través del aumento de especies reactivas del oxígeno (ERO) y especies reactivas del nitrógeno (ERN) se traduce en alteraciones oxidativas y nitrosativas de proteínas en plasma, y en particular en el nivel de proteínas nitrosiladas. MATERIALES Y MÉTODOS: El plasma de pacientes sanos y con SUH fue obtenido de hospitales de la ciudad de Córdoba. Se determinaron los productos proteicos de oxidación avanzada (AOPP) y las proteínas nitrosiladas en plasma de pacientes sanos en presencia y ausencia de las toxinas y en plasma de pacientes con SUH. Los AOPP fueron cuantificados por un ensayo colorimétrico con yoduro de potasio y ácido acético usando Cloramina T como estándar. Las proteínas nitrosiladas se determinaron espectrofotométricamente a 540 nm mediante el ensayo de Saville que involucra el uso de sulfamato de amonio y reactivo de Griess. RESULTADOS: El efecto in vitrodel extracto de toxinas sobre sangre normal incrementó significativamente los valores de AOPP desde 41,86 + 1,1 a 44,6 + 0,76 mol de equivalentes de cloramina T/ mg proteínas plasmáticas totales, y causó una reducción no significativa de proteínas nitrosiladas basales, de 0,33 + 0,01 a 0,29 + 0,01 µM proteínas nitrosiladas/mg proteínas plasmáticas totales. De modo tal que la relación AOPP/proteínas nitrosiladas en sangre no tratada fue de 126,8 y con las toxinas llegó a 153,8. Pero en el plasma de los 11 pacientes con SUH el nivel de AOPP fue 91,72 + 2,7 M Cloramina T/, significativamente mayor que en los controles de 71,7 + 2,1 M Cloramina T; y además aumentaron significativamente las proteínas nitrosiladas de 0,54 a 0,85 proteínas nitrosiladas/mg proteína totales respecto a los controles. Lo que se tradujo en una reducción en la relación AOPP/proteínas nitrosilada que pasó de 132,7 en los controles normales a 107,9 en los pacientes con SUH. CONCLUSIONES: Los resultados obtenidos refuerzan la idea de que la nitrosilación es un factor desfavorable que podría estar incrementada en los pacientes con SUH probablemente con deficiencia en la denitrosilación. Mientras que en sangre normal in Vitro el efecto de las toxinas no llevó a aumento de proteínas nitrosiladas como en los enfermos, los cuales podrían tener desbalance entre nitrosilación y desnitrosilación. Hay que tener en cuenta que en general la eliminación de proteínas nitrosiladas es más lenta que la eliminación de proteínas degradadas a AOPP, por lo que si aumentan las proteínas nitrosiladas el daño proteico permanece más tiempo, de modo que según los resultados obtenidos, los pacientes con SUH estarían sufriendo un daño nitrosativo importante.