Informe Técnico

AIASSA V

2022-07-25/2023-03-23

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Determinación de la actividad antimicrobiana de nanopartículas (Np) de albumina sérica humana (ASH)-vancomicina (Van): NpASH Van

Ciencias Quimicas

Salud humana

Se receptaron 4 muestras para ser evaluadas: 1)Np de ASH sin cargar (utilizada como blanco o control, es decir para evaluar el efecto de la Np en ausencia de Van)2)NpASH Van sin centrifugar (a estas Np se las dejó el sobrenadante con Van)3)NpASH Van centrifugada (a estas Np se las lavó para eliminar la Van que no estaba cargada en las Np4)Solución de Van comercial.Se determinó la concentración inhibitoria mínima (CIM) a Van de acuerdo a la metodología estandarizada por el Clinical & Laboratory Standars Institute (CLSI): Esta metodología consiste en realizar diluciones seriadas dobles del agente antimicrobiano en estudio con una concentración conocida y constante de inóculo bacteriano; luego la placa se incuba a la temperatura y tiempo necesarios (usualmente 18 h, 37 °C), y finalmente se determina la CIM, la cual se define como la mínima concentración de antibiótico capaz de inhibir el desarrollo visible (turbidez) del microorganismo.También se determinó la concentración bactericida mínima (CBM) a Van de acuerdo a las normas de CLSI: la CBM se obtiene, subcultivando una muestra de los tubos donde no se observó desarrollo al determinar la CIM sobre la superficie de placas de agar no selectivo para determinar la cantidad de bacterias sobrevivientes, expresado como unidades formadoras de colonias (UFC) por mililitro (UFC/mL), luego de un tiempo adecuando de incubación (frecuentemente 24 h) a 37 °C. La CBM se define como la mínima concentración de un antibiótico que es capaz de inducir la muerte in vitro del 99,9% de una población bacteriana previamente estandarizada en un período de incubación adecuado.Tanto la CIM como la CBM fuero determinadas en tres cepas de Staphylococcus aureus, 2 cepas clínicas meticilino resistentes (9455 y 771) y una cepa ATCC o de colección meticilino resistentes (SAMR 43300) de acuerdo a las normas de Clinical & Laboratory Standars Institute. De acuerdo a los resultados obtenidos se decidió continuar con la evaluación de la de la actividad antimicrobiana de las diferentes muestras en SAMR 43300. Esta determinación se llevó a cabo mediante la realización de curvas de muerte.La curva de muerte en función del tiempo también es un método estandarizado por la CLSI y consiste en determinar la viabilidad microbiana mediante el recuento de colonias en placas de agar a diferentes tiempos (0, 1, 2, 3, 6, 24 h) predeterminados, generalmente en un lapso de 24 h. La actividad antibacteriana se define entonces como una reducción equivalente a ≥ 3 Log10 UFC/mL en función del tiempo, en comparación con el inóculo inicial.En todos los casos los ensayos se realizaron por triplicado.