Las defensas celulares contra los efectos nocivos del estrés oxidativo involucran tanto componentes enzimáticos como no enzimáticos. La actividad enzimática es regulada acorde con los requerimientos celulares: pueden ser inducidas, inhibidas o activadas por efectores endógenos. Dentro de los sistemas antioxidantes no enzimáticos, GSH (glutatión reducido) es considerado un marcador de los niveles de actividad antioxidante y tiene un gran número de funciones que incluyen metabolismo, catálisis y transporte además de proteger a las células de los efectos de los radicales libres generados durante el metabolismo oxidativo.
El objetivo del trabajo fue determinar la actividad de la enzima superóxido dismutasa (SOD) y los niveles de GSH en Escherichia coli ATCC 25922 ante la generación de estrés oxidativo inducido por cloranfenicol (CMP).
Se investigó la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) mediante la reacción de Nitro Blue Tetrazolium (NBT).
Se cuantificó la enzima SOD, proveniente de cultivos de 18 h de e.coli en caldo tripteína soya (CTS) con CMP (4 y 32 mg/L) o sin antibiótico (basal), empleando la reacción de NBT y riboflavina.
Para la determinación de GSH se utilizó el reactivo de Ellman (5,5 ditiobis-2-ácido nitrobenzoico) el cual en presencia de GSH reacciona para formar un compuesto coloreado que se lee espectrofotométricamente a 412 nm. Los niveles de GSH fueron expresados por mg de proteína. La cantidad de proteína en la suspensión bacteriana fue determinada mediante el método de Folin-Ciocalteau.
La cepa de E.coli, sensible a CMP, aumentó la producción de ROS debido al estrés oxidativo generado por el antibiótico.
Se observó un incremento de la actividad SOD extracelular luego de 120 min de incubación con 4 mg/L de CMP.
Se apreció una disminución del 75% de los niveles de GSH con 4 mg/L de CMP; mientras que con 32 mg/L la disminución fue del 82% respecto del basal.
La capacidad antioxidante no se debe explicar en base a la actividad enzimática exclusivamente, sino a la contribución de componentes bacterianos no enzimáticos.
Los resultados indican que GSH tiene una función importante como componente del sistema antioxidante no enzimático frente al incremento de ROS generados por antibióticos en éste género bacteriano.
