Evaluación del efecto de doxiciclina en la neovascularización retinal

FORMICA M L; PAZ, MC; SUBIRADA, P; JORAY M; BARCELONA, P; LUNA, JD; SANCHEZ, MC; PALMA, SD

Córdoba

Congreso; Congreso AAFE-Asociación Argentina de Farmacología Expertimental-Primer congreso virtual; 2020

Asociación Argentina de Farmacología Expertimental (AAFE)

La doxiciclina (DXC) es un antibiótico semisintético que presenta efectos antiinflamatorios, inmunosupresoresy anticancerígenos; relacionados principalmente a la inhibición de la actividad de metaloproteinasas de matriz(MMPs). Con el objetivo de ampliar los blancos terapéuticos en la neovascularización (NV) asociada apatologías retinales isquémicas, se abordó el efecto in-vitro e in-vivo de la DXC sobre las MMPs y la NV retinal.En ensayos in-vitro, se evaluó la citotoxicidad de DXC en la línea celular de Müller (MIO-M1) y en célulasendoteliales de aorta bovina (BAEC) mediante el ensayo de MTT. Se estudió el efecto de DXC sobre la actividadde MMP-2 y 9 en MIO-M1 por zimografía, y sobre la angiogénesis mediante el ensayo de la formación detúbulos en BAEC. Células incubadas con vehículo se usaron como control (CC). En ratones C57BL/6 (2 meses),se evaluó la tolerancia a DXC inyectada por vía intravítrea (iv) mediante funcionalidad retinal porelectrorretinografía (ERG) y la histología retinal por tinción de H-Eo. En un modelo de retinopatía inducida poroxígeno (OIR) en ratones C57BL/6, se evaluó el efecto de DXC (iv) sobre la actividad y expresión de MMP-2 y9 en homogenatos de retina por zimografía y western-blot; y sobre la NV retinal mediante tinción conisolectina GSA-IB4 y anti-MMP-2 en retina completa. Se utilizó como grupo CC ratones C57BL/6 OIR convehículo (iv). Para cada grupo al menos un n=3 fue utilizado en cada ensayo. Las imágenes se tomaron conmicroscopio óptico o confocal y se analizaron por ImageJ. Se aplicó ANOVA 1vía/post-hoc Bonferroni para elanálisis estadístico.DXC presentó una citotoxicidad (MTT) menor al 20% por debajo de 60µg/mL (MIO-M1) y 6,25 µg/mL (BAEC).En comparación al CC, DXC disminuyó significativamente (52±4)% la actividad basal de MMP-2 y (39±3)% la deMMP-9 en MIO-M1; y (56±13)% la formación de túbulos en BAEC. En ratones C57BL/6, DXC no modificó losparámetros de ERG (ondas a y b) ni la histología retinal, indicando adecuada tolerancia ocular. Por otra parte,se observó una disminución en la actividad de MMP-2 y una tendencia a disminuir la NV retinal en los ratonesC57BL/6 OIR tratados con DXC respecto al CC.DXC, en dosis no citotóxicas, presentó acción inhibitoria sobre la actividad de MMPs tanto in-vitro como en laretina de ratones OIR, además de efecto antiangiogénico.