Rol de la mitocondria en la apoptosis de eosinófilos inducida por productos excretores-secretores de Fasciola hepatica

SERRADELL M.C.; GUASCONI L.; MASIH D.T.

Córdoba, Argentina

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

Asociación Argentina de Microbiología

Ha sido ampliamente demostrado que productos excretores-secretores (PES) liberados por Fasciola hepatica poseen diversos efectos inmunomodulatorios. Recientemente, hemos demostrado que estos PES son capaces de inducir apoptosis de eosinófilos (Eo) por un mecanismo que involucra la activación de caspasas -3, -8 y -9. Teniendo en cuenta que la activación de estas proteasas está fuertemente relacionada con la vía intrínseca de la apoptosis, en la cual la mitocondria juega un rol central, se decidió estudiar la posible participación de ésta vía durante la apoptosis de Eo mediada por los PES. Eo peritoneales de ratas Wistar normales se purificaron mediante gradiente con Percoll. El potencial de membrana mitocondrial, cuya disminución es una manifestación temprana durante la apoptosis, se midió mediante citometría de flujo en células teñidas con TMRE (tetrametilrodamina metil ester). Los Eo en presencia de los PES disminuyeron en forma significativa su potencial de membrana mitocondrial (p< 0,0012). Por la técnica de Western blot se determinaron los niveles de citocromo c (Cyt c) y del factor inductor de apoptosis (AIF), dos importantes factores proapoptóticos liberados por mitocondria. Se observó que los PES indujeron un aumento considerable en los niveles citosólicos de estos componentes. Por otra parte, mediante análisis de hipodiploidía en tinciones con ioduro de propidio, se observó que la apoptosis inducida por los PES disminuyó de manera significativa en presencia de rotenona (p< 0,009), un inhibidor mitocondrial. Finalmente, se determinó que la despolarización de la membrana mitocondrial no fue suprimida por el inhibidor de pan-caspasa Z-VAD-fmk, el cual si inhibió el fenómeno de apoptosis. Mediante estos resultados se demostró la participación de una vía mitocondrial en la apoptosis de Eo inducida por PES de F. hepatica, con despolarización a nivel de la membrana de mitocondria y liberación al citosol de factores proapoptóticos tales como Cyt c y AIF. Además, se pudo determinar que estos eventos preceden a la activación de caspasas.