Optimización de HPLC con detección UV para t-resveratrol

DANIELA BORDON; PATRICIA I. ORTIZ; VALERIA PFAFFEN

Congreso; VI Congreso Argentino de Química Analítica; 2011

El resveratrol es una fitoalexina de origen natural, generado por angiospermas en respuesta al daño producido por infecciones microbianas, radiación UV, ataque de agentes oxidantes, etc [1]. El resveratrol presenta propiedades antioxidantes y juega un papel muy importante en la prevención de ciertas enfermedades humanas. En tal sentido, se ha observado que este compuesto modula el metabolismo de lípidos, inhibe la oxidación de lipoproteínas de baja densidad, tiene propiedades antiinflamatorias, antitumorales y efectos neuro y cardioprotectivos [2, 3]. Este compuesto puede encontrarse en cantidades considerables en piel de uvas, vino, brandy y maní. Tiene dos isómeros: cis y trans (c- y t- resveratrol respectivamente). Se ha demostrado que las soluciones estándar de t-resveratrol se fotoisomerizan cuando son expuestas a la luz solar produciendo cambios en las relaciones isoméricas, ya que la concentración del isómero cis aumenta en detrimento del isómero trans hasta alcanzar un valor constante a tiempos de irradiación prolongados [4]. En un trabajo reciente [5], se sistematizó el uso de la longitud de onda y la potencia de irradiación y se mostró que ambos isómeros absorben la luz UV con una eficiencia proporcional a sus correspondientes coeficientes de absorción, dando como resultado otros productos secundarios. Para realizar un estudio sistemático de los procesos fotoquímicos de una solución de t-resveratrol mediante irradiación láser sintonizable, el análisis de los productos obtenidos debe llevarse a cabo mediante HPLC. Para cumplir con este propósito, el objetivo de este trabajo es encontrar las condiciones óptimas para la separación y cuantificación relativa de los productos de reacción mediante HPLC con detección UV. Para establecer las condiciones óptimas, se evaluaron los parámetros que influyen en la separación por HPLC de t-resveratrol y sus productos de reacción luego de la irradiación a 266 nm, empleando diseños de experimentos con la resolución cromatográfica como respuesta. En particular se analizó la velocidad de flujo y la composición de la fase móvil (fase orgánica, % fase acuosa, concentración de THF). A partir de los resultados, se lograron determinar las condiciones óptimas siendo estas: 1 mL min-1 de flujo isocrático, 50:50 de acetonitrilo-agua con 5 % de THF. Por otra parte, se determinó la curva de calibración con las condiciones experimentales resultantes, como así también el rango lineal, la sensibilidad y los límites de detección y cuantificación. Se estableció la precisión y exactitud de la metodología, pudiéndose concluir que el método optimizado y validado puede ser empleado para la determinación de t-resveratrol en presencia de sus productos de reacción. Bibliografía: [1] Trela, B. C.; Waterhouse, A. L. J. Agric. Fodd Chem. 44 (1996) 1253. [2] Huang, K. S.; Lin, M.; Cheng, G. F.; Phytochemistry 58 (2001) 357. [3] Zhuang, H.; Kim, Y. S.; Koehler, R. C.; Dore, S.Ann. N. Y. Acad. Sci. 276 (2003) 993. [4] Camont, L.; Cottart, C. H.; Rhayem, Y.; Nivet-Antonie, V.; Djelidi, R.; Collin, F.; Beaudeux, J. L.; Bonnefont-Rousselot, D. Anal. Chim. Acta 634 (2009) 121. [5] L. Gioda, Practicanato Profesional de la Lic. en Química de la FCQ ? UNC (2010)