Algunos medios de cultivo líquidos utilizados frecuentemente en cultivos celulares
utilizan asparagina (Asp) y glucosa (Glu) como fuentes de nitrógeno (N) y de carbono
(C), respectivamente(1). En estudios de actividad de Streptomyces sp. M7 (SM7)
realizados por impedancimetría, se encontró que la Asp se comporta como un interferente ya que se observaron respuestas similares para cultivos en medio mínimo líquido (MM) en presencia y en ausencia de la fuente de C. El objetivo de este estudio es dilucidar si la SM7 efectivamente consume Asp tanto
como fuente de N como de C. La determinación de Asp se efectuó amperométricamente utilizando electrodos compósitos de nanotubos de carbono modificados con micropartículas de cobre. La principal ventaja que presenta este sensor es la cuantificación de aminoácidos independientemente de su electroactividad y sin necesidad de derivatización previa(2).
Se realizaron cultivos de distintas concentraciones iniciales de SM7 en MM con Asp
3,33 mM en presencia y ausencia de Glu a 30°C sin agitación. Las muestras se tomaron cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -18oC
hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por método de Trinder(3). Para la cuantifiación de Asp residual se empleó amperometría con
transporte convectivo controlado, aplicando 0,0V (vs. Ag/ AgCl/ NaCl 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7 M, preparada en MM,
encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asp
preparadas en ?buffer? fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
realizados por impedancimetría, se encontró que la Asp se comporta como un
interferente ya que se observaron respuestas similares para cultivos en medio mínimo
líquido (MM) en presencia y en ausencia de la fuente de C.
El objetivo de este estudio es dilucidar si la SM7 efectivamente consume Asp tanto
como fuente de N como de C. La determinación de Asp se efectuó amperométricamente utilizando electrodos compósitos de nanotubos de carbono modificados con micropartículas de cobre. La principal ventaja que presenta este sensor es la cuantificación de aminoácidos independientemente de su electroactividad y sin necesidad de derivatización previa(2).
Se realizaron cultivos de distintas concentraciones iniciales de SM7 en MM con Asp
3,33 mM en presencia y ausencia de Glu a 30°C sin agitación. Las muestras se tomaron cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -18oC
hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por método de Trinder(3). Para la cuantifiación de Asp residual se empleó amperometría con
transporte convectivo controlado, aplicando 0,0V (vs. Ag/ AgCl/ NaCl 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7 M, preparada en MM,
encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asp
preparadas en ?buffer? fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
como fuente de N como de C. La determinación de Asp se efectuó amperométricamente
utilizando electrodos compósitos de nanotubos de carbono modificados con
micropartículas de cobre. La principal ventaja que presenta este sensor es la
cuantificación de aminoácidos independientemente de su electroactividad y sin
necesidad de derivatización previa(2).
Se realizaron cultivos de distintas concentraciones iniciales de SM7 en MM con Asp
3,33 mM en presencia y ausencia de Glu a 30°C sin agitación. Las muestras se tomaron cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -18oC
hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por método de Trinder(3). Para la cuantifiación de Asp residual se empleó amperometría con
transporte convectivo controlado, aplicando 0,0V (vs. Ag/ AgCl/ NaCl 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7 M, preparada en MM,
encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asp
preparadas en ?buffer? fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
Se realizaron cultivos de distintas concentraciones iniciales de SM7 en MM con Asp
3,33 mM en presencia y ausencia de Glu a 30°C sin agitación. Las muestras se tomaron cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -18oC
hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por método de Trinder(3). Para la cuantifiación de Asp residual se empleó amperometría con
transporte convectivo controlado, aplicando 0,0V (vs. Ag/ AgCl/ NaCl 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7 M, preparada en MM,
encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asp
preparadas en ?buffer? fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
3,33 mM en presencia y ausencia de Glu a 30°C sin agitación. Las muestras se tomaron
cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -18oC
hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por método de Trinder(3). Para la cuantifiación de Asp residual se empleó amperometría con
transporte convectivo controlado, aplicando 0,0V (vs. Ag/ AgCl/ NaCl 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7 M, preparada en MM,
encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asp
preparadas en ?buffer? fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por
método de Trinder(3). Para la cuantifiación de Asp residual se empleó amperometría con
transporte convectivo controlado, aplicando 0,0V (vs. Ag/ AgCl/ NaCl 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7 M, preparada en MM,
encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asp
preparadas en ?buffer? fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
transporte convectivo controlado, aplicando 0,0V (vs. Ag/ AgCl/ NaCl 3 M) como
potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del
sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados
obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7 M, preparada en MM,
encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asp
preparadas en ?buffer? fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó el
sensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asp
preparadas en ?buffer? fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
preparadas en ?buffer? fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se
consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin
embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al
10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con
experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la
SM7 por impedancimetría se debería reemplazar la Asp por otra fuente de N.
Referencias
Referencias
[1] Suutari M. et al, J Microbiol Methods 51 (2002) 411.
[2] Luque G.L. et al., Talanta 71 (2007) 1282.
[3] Trinder P., J Clin Pathol 22 (1969) 246. [4] López Rodriguez M.L. et al., 6to Congreso Iberoamericano sobre Sensores, IBERSENSOR 2008, Sao Paulo,
Brasil.
[2] Luque G.L. et al., Talanta 71 (2007) 1282.
[3] Trinder P., J Clin Pathol 22 (1969) 246. [4] López Rodriguez M.L. et al., 6to Congreso Iberoamericano sobre Sensores, IBERSENSOR 2008, Sao Paulo,
Brasil.
[3] Trinder P., J Clin Pathol 22 (1969) 246.
[4] López Rodriguez M.L. et al., 6to Congreso Iberoamericano sobre Sensores, IBERSENSOR 2008, Sao Paulo,
Brasil.
Brasil.
