O efeito de ureases vegetais, microbianas e peptídeos derivados na resposta imune de Rhodnius prolixus, um vetor da doença de Chagas

COSTE GRAHL MATHEUS; FRUTTERO LEONARDO; MOYETTA NATALIA; CARLINI CELIA REGINA

Porto Alegre

Otro; XI Semana de extension, pesquisa y posgraduacion. SEPesq. Centro Universitario Ritter dos Reis; 2015

As ureases são proteínas multifuncionais com funções independentes da atividade catalítica, como indução da exocitose e efeitos entomotóxicos. Estudos prévios em Rhodnius prolixus, um vetor da Doença de Chagas, evidenciaram que o tratamento com a urease de Canavalia ensiformis (Jack Bean Urease, JBU) desencadeia uma resposta imune na hemolinfa. Nos insetos, a resposta imune inata compreende mecanismos celulares e humorais, incluindo fagocitose, encapsulamento, melanização, síntese de peptídeos anti-microbianos assim como a ativação da cascata pro-fenoloxidase (pro-PO). As enzimas POs participam da melanização e do encapsulamento de patógenos na hemolinfa, além de produzir quinonas que são toxicas para microorganismos. O objetivo deste projeto é caracterizar a resposta imune induzida pela JBU, a urease de soja (Soybean urease, SBU), as uréases microbianas e o Jaburetox (JBTX, peptídeo recombinante derivado da JBU) em R. prolixus. O efeito das toxinas in vivo e in vitro será testado injetando-as ou incubando-as com os hemócitos e contando o número de agregados e de células livres em hemocitómetro. Serão estabelecidas culturas de células hemolinfáticas para avaliar o efeito das toxinas no citoesqueleto por imunofluorescência. Finalmente, a atividade da pro-fenoloxidase (pro-PO) em insetos controles e tratados com as toxinas serão avaliados utilizando-se o substrato L-DOPA e acompanhando a formação de dopacromo por espectrofotometria. Os resultados preliminares indicaram que o tratamento com JBTX tanto in vivo quanto in vitro, induziu a agregação dos hemócitos. Além disso, os ensaios in vitro com EGTA (quelante de cátions), demonstraram que o JBTX induz uma resposta imune celular dependente de cálcio extracelular. A elucidação dos mecanismos de ação entomotóxica das ureases e peptídeos derivados são fundamentais para o desenvolvimento de aplicações que levem ao uso destes compostos como bioinseticidas.