Formación de biofilm de Enterococcus faecalis en conducto radicular de dientes

MARTIN G, ARCE MIRANDA JE, ANGEL VILLEGAS N, RAVETTI S, VISVISIN C, PARAJE MG

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

FORMACIÓN DE BIOFILM DE ENTEROCOCCUS FAECALIS EN EL CONDUCTO RADICULAR DE DIENTES HUMANOS EXTRAÍDOS

MARTN, G (FAC. ODONTOLOGÍA-UNC); ARCE MIRANDA, J (FAC CS QUÍMICAS-UNC); ANGEL VILLEGAS, N (FAC CS QUÍMICAS-UNC); RAVETTI, S (FAC CS QUÍMICAS-UNC); GANI O (FAC ODONTOLOGÍA-UNC); VISVISIAN, C (FAC ODONTOLOGÍA-UNC); PARAJE, MG (FAC CS QUÍMICAS-UNC)

Introducción
La cavidad bucal posee aspectos ecológicos que facilitan el establecimiento y crecimiento de una gran variedad de microorganismos como bacterias, hongos y virus. La placa dental es un verdadero biofilms, definido como conjunto de microorganismos aerobios y anaerobios localizados en la cavidad oral que se adhieren a la superficie dentaria, espacios interdentarios u otras superficies, formando una comunidad estructurada y heterogénea de células sésiles rodeadas por una matriz exopolisacárida de origen salival y microbiano.
La formación de este biofilms incluye una serie de pasos que comienzan con la colonización inicial de la biopelícula y termina con la compleja formación de un biofilm maduro generalmente mixto. Dentro de la placa los microorganismos sobreviven con fenómenos de sinergismos y cooperación, produciendo sustancias necesarias para otras especies vecinas, sustancias adherentes que se entremezclan y conservan el biofilms intacto sobre la superficie dental pudiendo producir infecciones.
En las infecciones endodónticas secundarias predomina Enterococcus faecalis, especie que necesita escasa cantidad de nutrientes y es resistente a la acción de los irrigantes y soluciones antisépticas usadas durante el tratamiento de endodoncia.

Objetivo
Desarrollar un modelo de infección por E. faecalis en conductos radiculares de dientes extraídos de humanos y en superficies abióticas, con capacidad de formar biofilms.

Materiales y Métodos
Se realizó la infección de los dientes (n=20) con un cultivo ?over night? de E. faecalis ATCC 29212 en el conducto radicular y posterior incubación durante 60 días a 37°C.
La formación de biofilms ?in vitro? de se cuantificó mediante la adhesión a placas de poliestireno de 96 wells, coloración con cristal violeta, elución con alcohol/acetona y posterior cuantificación espectrofotométrica para determinar la densidad óptica (D.O.) a 595 nm. La expresión del curli característico de especies formadoras de biofilm se analizó mediante la técnica de rojo congo.
Por microscopía confocal de exploración láser (MCEL) y coloración diferencial con dos marcadores fluorescentes con ioduro de propido/isotiocianato de fluoresceína (FITC) se estudió la formación de biofilm en el conducto radicular en los dientes infectados.

Resultados
E. faecalis ATCC 29212 aislada del conducto radicular, posterior a su infección, mostró alta formación de biofilm (D.O.: 3,365 +/- 0.021) estudiada por microtécnica en superficies poliméricas.
Con la técnica del rojo congo se visualizaron las características colonias negras de cepas formadoras de biofilms.
MCEL se pudo observar la formación de biofilm en el conducto radicular, obteniendo información de la estructura en 3 dimensiones y la diferenciación entre la matriz extracelular coloreada de verde por FITC y las células sésiles teñidas de naranja por el IP.

Conclusiones

El modelo de infección diseñado resultó apropiado para evaluar la formación de biofilms de E. faecalis tanto en el conducto radicular del diente como en superficies poliméricas. Este modelo podría ser útil para estudios posteriores de la acción de irrigantes o soluciones antisépticas para el control de las enfermedades endodónticas secundarias.