Generación de Especies Reactivas del Oxigeno y Capacidad de defensa de cepas de Escherichia coli productoras de toxina Shiga.

ANGEL VILLEGAS N, BONGIOVANNI ME, ALBESA I, PARAJE MG, BECERRA MC

Córdoba

Jornada; VII Jornadas de Bioquímica Clínica; 2010

Asociación de Bioquímicos de la provincia de Córdoba

Introducción: Escherichia coli productor de toxina shiga (STEC), es un patógeno emergente que se asocia a casos esporádicos y a brotes de diarrea con y sin sangre, colitis hemorrágica y Síndrome Urémico Hemolítico. Las especies reactivas del oxígeno (ERO) son generadas en todos los organismos aeróbicos por reacciones enzimáticas y no enzimáticas y en condiciones de estrés sus niveles pueden aumentar en gran medida, lo cual puede resultar en daños significativos a las estructuras celulares. Esto lleva en una situación conocida como estrés oxidativo. Objetivo: Indagar la relación entre el estrés oxidativo y la capacidad antioxidante de cepas de E.coli productoras de toxina Shiga frente a la acción de Ciprofloxacina (CIP). Materiales y Métodos: Se analizó una cepa clínica (E.coli O157:H7) y una cepa de referencia (E.coli EDL 933). Se determinó la sensibilidad a CIP mediante el método de dilución en tubo según normas internacionales. Se cuantificó la producción de ERO (Densidad óptica) por el método de Azul de nitrotetrazolio (NBT) y quimioluminiscencia (Unidades relativas de luz, URL) a distintas concentraciones del antibiótico. La capacidad antioxidante se determinó mediante el ensayo FRAP (Ferric reducing/antioxidant power assay). Los datos fueron analizados por comparación de medias usando el test de Student. Las diferencias con p<0,01 fueron consideradas significativas. Resultados: El valor de Concentración Inhibitoria Mínima obtenido fue de 0,03125 ug/ml para ambas cepas. Hubo mayor producción de ERO intracelular (D.O entre 1,090±0,036 y 1,500±0,013) que extracelular (D.O entre 0,135±0,008 y 0,182±0,003) en ambas cepas, tanto en condiciones basales como en presencia de CIP. La cepa clínica presentó menor producción de ERO intracelular (D.O=1,190±0,036) y extracelular (D.O=0,154±0,001) comparada con la cepa de referencia (D.O intracelular=1,500±0,013; D.O extracelular= 0,182±0,003). Por quimioluminiscencia se pudo apreciar que CIP en la cepa clínica indujo menor producción de ERO (URL=0,859±0,039) que en la de referencia (URL=1,964±0,045). Se observó en la cepa clínica un marcado aumento de la capacidad antioxidante a diferencia de la cepa de referencia (71,17± 4,98 µM FeSO4/mg proteína). Conclusiones: Estos resultados sugieren que CIP generaría menor injuria oxidativa en la cepa clínica que en la cepa de referencia y esto se pudo correlacionar con la mayor capacidad antioxidante que posee la cepa clínica.