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UNIDAD TEMATICA |
Microbiología Básica: Bacteriología |
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E-mail del expositor |
jarce@fcq.unc.edu.ar |
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Institución |
Lab. de Higiene y Microbiología, Dto de Farmacia, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba. |
Los macrófagos son células activamente involucradas en la respuesta inmune innata durante las infecciones bacterianas. Existen numerosas investigaciones sobre la relación entre sistema inmune y P. aeruginosa en forma planctónica, pero está menos descrita la correlación con el biofilm. En este trabajos se estudia la interacción de cuatro cepas clínicas y una ATCC de P. aeruginosa formadoras de biofilm con macrófagos de rata (células Raw) a las 48 hs de co-cultivo. Parámetros como viabilidad celular, morfología, estimulación de especies reactivas del oxígeno (ROS) y de óxido nítrico (ON) fueron analizados a dos concentraciones de inóculo inicial de las cepas bacterianas vivas y muertas por calor (0,3 y 3 106/well - relación 1/30 y 1/300). La viabilidad celular se determinó por la liberación de la enzima lactato dehidrogenasa (LDH) y la técnica del MTT. Las especies reactivas del oxígeno (ROS intra y extracelular) se determinaron por reducción Azul de Nitro Tetrazolium (NBT) y los niveles de nitrito total producidos en sobrenadante de cultivo por la técnica de Griess. Alteraciones en la morfología de los macrófagos se observaron por microscopía de contraste de fase a las 24 hs; a las 48 hs se evidenció formación de biofilm, posteriormente la viabilidad de los macrófagos disminuyó. A las 48 hs de co-cultivo se observó más de 10 veces más producción de ROS extracelular que intracelular, aunque ambos fueron dependientes de la concentración en las cinco cepas ensayadas; las bacterias muertas por calor no estimularon a las macrófagos en forma significativa, comparado con las cepas formadoras de biofilm. Los niveles de nitrito total producidos en sobrenadante de cultivo fueron mayores a la menor concentración con valores similares tanto para las bacterias vivas como para las muertas. Los biofilm de las cepas de P. aeruginosa sin la presencia de los macrófagos mostraron menor estimulación de ROS extracelular y mayor de ON a las 48 hs.
Podemos concluir que: 1) existió una competencia entre los sitios de adhesión entre las células del sistema inmune y las células bacterianas formadoras de biofilm hasta las 48 hs de co-cultivo; 2) las bacterias en biofilm activaron tanto la vía del oxígeno como la del ON; 3) el aumento de ROS en las células macrofágicas fue dependiente del inóculo bacteriano inicial y la viabilidad; 4) la estimulación del ON fue independiente de la viabilidad y concentración bacteriana.
