Efecto de antibióticos sobre el biofilms, su relación con el estrés oxidativo y la liberación de Toxina Shiga.

- ANGEL VILLEGAS N., BECERRA M.C., POLIFRONI R., PARMA A., ETCHEVERRÍA A., PADOLA N., ALBESA I., PARAJE M.G.

Congreso; XII Congreso Argentino de la Sociedad Argentina de Infectología ? SADI 2012; 2012

29537 EFECTO DE ANTIBIÓTICOS SOBRE EL BIOFILMS, SU RELACIÓN CON EL ESTRÉS OXIDATIVO Y LA LIBERACIÓN DE TOXINA SHIGA Angel Villegas, N.(1); Becerra, M.C.(1); Polifroni, R.(2); Parma, A.(2); Etcheverría, A.(2); Padola, N.(2); Albesa, I.(1); Paraje, M.G.(2) Dto. de Farmacia, IMBIV-CONICET, Fac. Ciencias Químicas, Univ. Nac. de Córdoba; Lab. Inmunoquímica y Biotecnología, Fac. C. Veterinarias, U. Nac. del Centro de la Pcia. Bs. As. Escherichia coli O157:H7 es un patógeno transmitido por alimentos que se asocia a brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). Este serotipo es el más frecuentemente asociado al SUH post diarrea, donde se ha demostrado la exposición a verotoxinas o toxinas Shiga (Stx) en el 85% de los casos, sin embargo otros serogrupos también pueden producir esta toxina. En Argentina, el SUH post-entérico asociado a esta bacteria es endémico y se producen aproximadamente 400 a 500 casos nuevos por año, con el registro más alto de SUH de todo el mundo. La patogenicidad de esta bacteria está asociada con varios factores de virulencia, entre los que se incluyen la producción de la Stx (1 y 2). Las cepas más virulentas de E. coli productora de toxina Shiga (STEC) además poseen otros factores de virulencia como enterohemolisina (ehxA) e intimina (eae). Una nueva característica que podría estar asociada a la virulencia podría ser la capacidad que poseen las STEC para formar biofilms, existiendo escasos repor tes en STEC. El biofilm, por su naturaleza estructural y las características de las células sésiles, tienen una resistencia intrínseca a agentes antimicrobianos. Varias razones han sido investigadas, aunque el mecanismo preciso de cómo se altera esta sensibilidad no está esclarecido. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de antibióticos, uno bacteriostático (Rifaximina) y otro bactericida (Ciprofloxacina) sobre el biofilm, el estrés oxidativo y la liberación de Stx. Se utilizaron dos cepas clínicas de E. coli (O157:H7 y O111:H-) asociadas a casos de SUH de Córdoba y una de referencia (O157:H7 EDL 933). Se determinó la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) y se trabajó a dos concentraciones subCIM y dos supraCIM. La capacidad de formar biofilms de las cepas de STEC se determinó mediante la adhesión a placas de poliestireno de 96 wells y su posterior coloración con cristal violeta determinando la densidad óptica a 595 nm. El estrés celular se estudió determinando las Especies Reactivas del Oxígeno (ERO) utilizando Azul de Nitro Tetrazolio (540 nm) y las Especies Reactivas del Nitrógeno (ERN) mediante la técnica de Griess. El sistema antioxidante de defensa fue evaluado por la determinación de las enzimas superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT) y la capacidad antioxidante total se estudió por FRAP (ferrous reduction antioxidant potency). La liberación de toxina fue determinada en sobrenadantes de cultivos por ensayo de citotoxicidad en células Vero, considerado como la técnica ?gold estándar? para la determinación de Stx. Se observó estrés oxidativo con los dos antibióticos en los distintos serotipos estudiados, sin embargo sólo con Ciprofloxacina se pudo lograr la erradicación del biofilms. Además, cuando disminuía la formación de biofilms, aumentaba tanto el estrés oxidativo, con disminución del sistema antioxidante y la capacidad antioxidante total. El efecto citotóxico en Células Vero aumentó notablemente en condiciones de alto estrés, no existiendo repor tes hasta el momento de este efecto ni de la liberación de Stx desde las células sésiles del biofilms. Conclusiones: Los antibióticos mostraron diferencias tanto en la erradicación del biofilm como en el desbalance oxidativo producido, siendo más marcado este desbalance con el antibiótico bactericida. Estos resultados sugieren que desde el biofilm existe liberación de Stx lo cual podría estar relacionado al estrés que sufren las células sésiles que forman par te del biofilms.