PARTICIPACIÓN DE LAS VÍAS DE SEÑALIZACIÓN EN LA FOSFORILACIÓN DEL DOMINIO AMINO TERMINAL DE ZEB1 Y SU LOCALIZACIÓN SUBCELULAR

LLORENS MARÍA CANDELARIA; CAVALLO, NATALIA; PERRONE ANA PAULA; CABANILLAS, ANA MARÍA

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Participación de las vías de señalización en la fosforilación del dominio amino terminal de ZEB1 y su localización subcelular. Llorens María Candelaria, Cavallo Natalia, Perrone Ana Paula y Cabanillas, Ana María. Dpto Bioquímica Clínica, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional Córdoba, CIBICI-CONICET ZEB1 (Zinc Finger E-box binding Homeobox) factor de transcripción involucrado en la diferenciación celular, EMT y metástasis; contiene dos dominios de dedos de Zn que flanquean un homeodominio central y se presenta bajo dos formas hiper e hipofosforiladas. Nuestro objetivo fue determinar que vía/s de señalización intracelular estarían involucradas en la fosforilación de la región aminoterminal de ZEB1 (N-ZEB1) y como eso repercute en su localización subcelular. Se realizaron ensayos de inminoprecipitación N-ZEB1 en células HEK293T previamente tranfectadas con un clon que expresa dicha región y posterior Western Blot revelado con diferentes anticuerpos anti-fosfosustrato específicos, lo cual mostró que N-ZEB1 es modificado postraduccionalmente por fosforilación y las vías de señalización involucradas serían PI3K(AKT), MAPK(CDKs) y PKC. Para estudiar la localización subcelular de N-ZEB1 se realizó microscopia de fluorescencia en células CHO-K1 tranfectadas con dos clones, de diferente longitud, de dicha región fusionados a GFP, eGFPZpst bgl(mayor) y eGFPZpstbam(menor) y posteriormente tratadas con diferentes activadores e inhibidores de vías. Los tratamientos con PD98095; CalC; LY294002; NVP-ADW742 (inhibidores de MEK/ERK, PKC, PI3K e IGF1 respectivamente) tanto en el clon eGFPZpst bgl como eGFPZpstbam mantiene la señal GFP nuclear. El tratamiento con PMA/Iomicina (activador de PKC) reveló una fuerte señal citosólica en ambos clones. El tratamiento con IGF1 mostró una señal citosólica en el clon eGFPZpstbgl, mientras que en el clon eGFPZpstbam la señal fue nuclear. Estos resultados sugieren que el cambio de estado de fosforilación de la región N-ZEB1 induce cambios en su localización subcelular y que las vías de señalización involucradas serían PKC e IGF1 en eGFPZpst bgl y PKC en eGFPZpstbam. Múltiples vías se señalización parecen estar involucradas en la fosforilación de N-ZEB1, sin embargo la fosforilación inducida por las vías de IGF1 y PKC contribuirían en el rol biológico de ZEB1 mediante un cambio de localización subcelular.