PKCα REGULA A ZEB1 EN LINEAS CELULARES DE CÁNCER DE MAMA

LLORENS MARÍA CANDELARIA; LÓPEZ-HABER C; BARRIO-REAL L; KAZANIETZ M ; CABANILLAS ANA MARIA

Buenos Aires

Simposio; Ganando la guerra contra el cáncer. Simposio Internacional Programa RAICES Red de Científicos Argentinos en el Noreste de EE.UU.; 2016

Programa RAICES

La progresión tumoral puede ser activada por señales de citoquinas que regulan factores de transcripción como ZEB1 o Snail. Intentamos descubrir el rol de la vía de PKC en la regulación de ZEB1. Isoformas de PKC, ZEB1 y marcadores de EMT fueron determinados por immunoblot en 9 líneas celulares neoplásicas mamarias. PKCα y ZEB1 mostraron correlación positiva significativa (p≤0.05). El silenciamiento de PKCα mediante 2siRNA redujo significativamente la expresión de ZEB1(72hs) en MDA-MB231 (siPKCα1,2: 0,64 ± 0,06 y 0,67 ± 0,06 vs siNonTarget SiNT:1)(p≤0,05), también en MDA-MB453, BT549 (72/96hs) y en MDA-MB-231(96hs), sin embargo el ARNm(qPCR) de ZEB1 no se modificó, sugiriendo que PKCα podría regulas la estabilidad proteica de ZEB1. La capacidad invasiva (invasión en Matrigel®) de células MDA-MB231 silenciadas por 6siPKCα o 4siZEB1 se redujo significativamente contra las células control (siPKCα1,2,3,4,5,6: 40,3 ± 3,5; 52,6 ± 4,2; 53,4 ± 2,6; 52,0 ± 2,8; 42,7 ± 2,4; 59,6 ± 3,1 vs SiNT: 83,1 ± 2,9)(p≤0.0001) (siZEB1 1,2,3,4: 25,2 ± 2,3; 31,0 ± 2,49; 80,3 ± 3,0; 39.7 ± 2.7 vs SiNT: 150,6 ± 3,9)(p≤0.0001). Evaluamos por tinciones de faloidina-rodamina la respuesta del citoesqueleto de actina ante un estímulo (10%SFB) en MDA-MB231/siPKCα o siZEB1. Las células control o siZEB1 mostraron lamelipodios y prolongaciones citoplasmáticas en respuesta al estímulo, mientras que las células MDA-MB231/siPKCα no respondieron al estímulo. Los resultados fueron expresados como media±S.E.M. Los resultados sugieren que PKCα podría regular la expresión de ZEB1 en células neoplásicas mamarias mediante la modificación de su estabilidad proteica. La pobre formación de lamelipodios presentada en MDA-MB231/siPKCα en comparación con la respuesta normal de MDA-MB231/siZEB1 sugiere que PKCα es capaz de regulas la invasión mediante un mecanismo dependiente de ZEB1 y otro independiente de ZEB1. PKCα es un regulador novel de ZEB1 y por lo tanto de la invasión celular en cáncer de mama.