Eficacia de TMPyP4+ en la fotoinactivación de Pseudomonas aeruginosa resistentes a ROS

Bariloche

Congreso; IV GRAFOB 2018; 2018

IV GRAFOB

Eficacia de TMPyP4+ en la fotoinactivación de Pseudomonas aeruginosa resistentes a ROSEfficacy of TMPyP4+ in photoinactivation of ROS-resistant Pseudomonas aeruginosaLuciana P. Campagno*, Fabiana L. AloveroDepartamento de Ciencias Farmacéuticas, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba. UNITEFA-CONICET. Córdoba, ARGENTINA. X5000HUAE-mail: campagnolucianapaula@gmail.com / fallover@fcq.unc.edu.arPseudomonas aeruginosa se encuentra comúnmente en el suelo, el agua, lugares húmedos y la mayoría de los ambientes creados por el hombre. Es un patógeno oportunista que, con frecuencia tiene que hacer frente a la toxicidad de ROS en el medio ambiente, así como dentro del huésped. Su amplia versatilidad metabólica y sustancial número de genes facilitan la adaptabilidad para prosperar en diferentes hábitats, y permite una respuesta rápida a diversos estímulos y desafíos.Las flavodoxinas descriptas en diversos microorganismos son flavoproteínas que juegan un papel protector importante contra las especies reactivas de oxigeno (ROS) 1 . Sólo algunas cepas de P.aeruginosa contienen el gen que las codifica (fldP), por lo cual se lo considera un componente genómico accesorio inducido bajo estrés oxidativo, que aporta protección contra el daño fisiológico y mutacional causado por ROS, expandiendo las capacidades de P.aeruginosa para prosperar en ambientes hostiles2.En este trabajo se presentan los resultados obtenidos al evaluar el efecto de la concentración (1-20 µM) de 5,10,15,20-tetra(4-N metilpiridil) porfirina (TMPyP4+) y del tiempo irradiación con luz visible (15, 30 y 45 min) en la fotoinactivación de 3 cepas de P.aeruginosa: PA 14 (cepa wild type que contiene gen fldP, exhibe resistencia a ROS generadas con H202), fldp-P2 (PA 14 con mutación en gen fldP, sensible a esas ROS) y fldp-P2+isiβ (PA 14 con mutación en gen fldP, suplementada con gen isiB de Anabaena cuyo efecto protector frente a estrés oxidativo fue ampliamente documentado, exhibiendo mayor resistencia a ROS que cepa wild type). Los recuentos de bacterias viables remanentes luego de la exposición a la luz se efectuaron en medio sólido, incubando las placas a 37°C ? 24 hs. TMPyP4+ no exhibió toxicidad en oscuridad frente a las 3 cepas evaluadas. Cultivos expuestos a luz exhibieron fotoinactivación dependiente de la concentración de FS y de el tiempo de irradiación, alcanzando erradicación total del inóculo con 5 µM de FS y 45 min, sin diferencias significativas entre las 3 cepas (se utilizó el test no paramétrico de Kruskal Wallis, el test Dunn´s multiple ò el t`student, según caso). El FS es eficaz en la fotoinactivación de P.aeruginosa, independientemente de la presencia del gen para la flavodoxina. Esto indicaría que el mecanismo de acción del FS para erradicar a P. aeruginosa es diferente del utilizado por la bacteria para defenderse de las ROS generadas por exposición a H2O2. Lo observado refuerza la potencial utilización de la porfirina catiónica en procesos infecciosos por P.aeruginosa, microorganismo difícil de erradicar, sea con terapias convencionales como con terapia fotodinámica antimicrobiana. Referencias1.Li L, Naseem S, Sharma S, Konopka JB (2015). PLoS Pathog 11(9): e1005147. doi:10.1371/journal.ppat.10051472.Moyano AJ, Tobares RA, Rizzi YS, Krapp AR, Mondotte JA, et al. (2014). PLoS Genet 10(2): e1004163. doi:10.1371/journal.pgen.1004163,