Análisis cuantitativo de la co-localización de Rab1b con sus efectores de la vía secretora

HERNÁN MARTINEZ; IRIS A. GARCÍA; LUCIANA SAMPIERI; CECILIA ALVAREZ

La Falda

Jornada; XIX Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2013

Sociedad de Biología de Córdoba

La GTPasa Rab1b participa en el transporte anterógrado deproteínas y lípidos en la vía secretora mediante la interacción conmúltiples proteínas (efectores) localizadas en diferentesestructuras que la componen. Algunos de estos efectores y sulocalización son: 1) proteínas del complejo COPII, en sitios desalida del Retículo Endoplásmico (ERES); 2) proteínasrelacionadas a COPI, en estructuras túbulo-vesiculares (VTCs), y3) factores de anclaje o ?tethering?, como p115 y GM130, enVTCs y cis-Golgi, respectivamente. Aunque estas interaccioneshan sido bien caracterizadas, se desconoce la relaciónespacio/temporal de las mismas y su dinámica durante eltransporte anterógrado del cargo.En este trabajo analizamos cuali y cuantitativamente, mediantemicroscopía confocal, la co-localización de Rab1b con susefectores localizados en estructuras COPII, VTCs y Golgi en dossituaciones: 1) En estado estacionario o de equilibrio entretransporte anterógrado y retrógrado; y 2) cuando el cargo estáacumulado en el RE por el efecto de Brefeldina A (BFA). Paraverificar la validez de las cuantificaciones, se evaluó la co-localización de proteínas de ubicación conocida. Los resultadosindican que: -la estrategia empleada para la cuantificación esválida; -la co-localización de Rab1b con efectores localizados enCOPII y VTCs incrementa entre dos a tres veces cuando se utilizaBFA. Ensayos de time-lapse indican que Rab1b co-localizatransitoriamente con estructuras COPII, las cuales presentanmayor estabilidad que Rab1b a lo largo del tiempo.