El bloqueo de la vía HIF-1/Autofagia aumenta la eficiencia de la terapia fotodinámica en células de cáncer de colon humano : estudio 2D, 3D e in vivo.

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2015

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS)

El microambiente del tumor posee heterogeneidad de disponibilidadde nutrientes, pH y oxigenación. La hipoxia induce la activación de HIF-1, el cual regula la expresión de genes asociados con la supervivencia celular, incluyendo genes autofágicos. La hipoxia y la autofagia han sido reconocidas como mecanismos de resistencia a tratamientos antitumorales incluyendo la Terapia Fotodinámica (TFD).Objetivo:evaluar el impacto de HIF-1a como modulador de autofágica en cultivos 2D, 3D e in vivo de cáncer de colon. Determinar suimplicancia en la resistencia a TFD. Resultados: Se demostró que la activación de HIF-1, empleando CoCl2 indujo autofagia a través de un nuevo mecanismo que involucra la regulación transcripcional de VMP1. HIF-1 aumentó el flujo autofágico determinado por un aumento de la relación LC3-II/LC3-I, disminución de p62,aumento de VMP1 y agregación de GFP-LC3. Además, mediante ensayo de MTT determinamos que la autofagia inducida por HIF-1 promueve resistencia a la TFD.Por otro lado, generamos cultivos tridimensionales que imitan la arquitectura detumor sólido. Mediante el plásmido reportero 5HRE-EGFP corroboramos la activación de HIF-1. Además generamos líneas estables ?K.D? (shHIF1a) y ?WT? (Ctrl) y demostramos que los esferoides poseen actividad autofágica dependiente de HIF-1 que confiere resistencia a la TFD. En ambos modelos de estudio, la combinación de TFD con diferentes inhibidores de autofagia aumentó la muertecelular. Utilizando ratones nude se generaron tumores WT, K.D. o WT + cloroquina, luego se trataron con 200 mg/Kg del ALA-Met y se irradiaron con 60 J/Cm2. Observamos una pobre respuesta de tumores WT y K.D. al tratamiento,sin embargo se observó una disminución en el porcentaje de crecimiento en la combinación de WT+cloroquina+TFD. Conclusión: La activación de autofagia en hipoxia a través de HIF-1/VMP1 confiere resistencia a la TFD. El bloqueo dela autofagia aumenta la eficiencia del tratamiento.