Tioesterasas APT-1 y APT-2: Expresión y caracterización bioquímica

PEDRO M.P.; VILCAES A.; TOMATIS V.M.; DANIOTTI J.L.

Buenos Aires

Jornada; V Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2012

Comite Organizador

APT-1 y APT-2 (Acyl Protein Thioesterases) fueron inicialmente descriptas como lisofosfolipasas. Luego se demostró actividad tioesterasa de APT-1 sobre proteínas periféricas S-aciladas. Recientemente también observamos que APT-2 presenta una similar actividad catalítica. Con el objetivo de investigar con mayor detalle las propiedades de APT-1 y 2, las mismas fueron expresadas en E. coli, purificadas, caracterizadas y sometidas a estudios bioquímicos y enzimáticos comparativos, utilizando el sustrato palmitoil-CoA (P-CoA). Demostramos que APT-1 y 2 hidrolizan P-CoA con diferentes Km, dentro del mismo orden de magnitud. APT-1 y 2 no presentan preferencia por el sustrato en su estado monomérico o micelar (CMC ~100 µM). Sin embargo, en altas concentraciones de sustrato (600 µM) se observó una drástica disminución de la actividad de ambas APTs, lo cual no fue observado cuando el detergente zwitterionico CHAPS estuvo presente en la reacción. Estas observaciones sugieren que a 600 µM P-CoA ocurriría un cambio estructural del lípido, afectando su calidad como sustrato de APTs. Este fenómeno fue revertido ante la presencia del detergente, el cual eventualmente conduce a la formación de micelas mixtas. Asimismo, y ante indicios previos obtenidos en líneas celulares, evaluamos el efecto de 2-bromopalmitato (2-BP), un análogo del ácido palmítico, sobre la actividad de APTs. Sorprendentemente, observamos una significativa inhibición de la actividad de ambas enzimas, siendo más notorio para APT-1. 2-BP es ampliamente utilizado como inhibidor de enzimas con actividad catalítica (aciltransferasas) opuesta a las APTs, por lo que los hallazgos descriptos deberían ser considerados al analizar resultados obtenidos en sistemas celulares utilizando 2-BP.