Desarrollo de una estrategia antitumoral utilizando un anticuerpo dirigido contra el gangliósido GD3

TORRES DEMICHELIS V.A.; VILCAES A.; IGLESIAS-BARTOLOMÉ R.; RUGGIERO F.M.; DANIOTTI J.L.

Jornada; Sextas Jornadas de Postgrado de la Facultad de Ciencias Químicas; 2013

El gangliósido GD3 es un marcador tumoral validado, por lo que el anticuerpo monoclonal (mAb) R24 dirigido contra este glicolípido tiene un valor terapéutico potencial. En trabajos previos de nuestro laboratorio demostramos en células CHO-K1GD3+ que el mAb R24 es rápida y selectivamente internalizado luego de su unión a GD3 en membrana plasmática, acumulándose en endosoma de reciclado. Resultados similares de internalización, aunque con cinéticas diferentes, fueron observados en células de melanoma humano SK-Mel 28. En la línea celular de melanoma murino B16GD3+, el complejo GD3-R24 es internalizado, pero con un destino intracelular diferente. La rápida internalización del mAb R24 observada en algunos tipos celulares no favorecería su uso como inmunoterapéutico debido a que pierde la posibilidad de activar vías del complemento o citotoxicidad. Sin embargo, es posible utilizar la capacidad de internalización del anticuerpo para el direccionamiento específico de agentes citotóxicos a células cancerígenas que expresen GD3. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto citotóxico de saporina en células de origen tumoral mediante el uso del mAb R24. Para ello, se incubaron in vitro células con diferentes concentraciones de anticuerpos primarios (3-60 nM) y secundarios (1-8 nM, acoplado o no con saporina) durante 72 h, y se determinó la viabilidad celular. Se observó una disminución de 70%, 40% y 30% de la viabilidad celular en las células CHO-K1GD3+, SK-Mel 28 y B16GD3+, respectivamente, cuando las mismas fueron tratadas con el complejo mAb R24/Ac-saporina. El efecto específico del conjugado citotóxico fue corroborado por una falta de efecto sobre células GD3 negativas. Se obtuvieron resultados similares utilizando R24-biotina y saporina acoplada a estreptavidina en células SK-Mel 28. Además, se evaluó la actividad antitumoral del complejo R24/Ac-saporina sobre el crecimiento clonogénico de células SK-Mel 28 y CHO-K1GD3+ cultivadas en condiciones libres de adhesión al sustrato. Se observó una inhibición drástica del crecimiento (> 80-90%) de las colonias de células luego de 3 días de tratamiento con la inmunotoxina R24/Ac-saporina. Por el contrario, no se observó efecto en el crecimiento de las colonias en ausencia del anticuerpo R24 o de la toxina, indicando la especificidad del fenómeno observado. Estos resultados abren grandes posibilidades para la utilización de los anticuerpos monoclonales específicos de glicolípidos como una herramienta para el diseño futuro de estrategias antitumorales, usufructuando la capacidad de los mismos para el transporte específico de agentes citotóxicos.