Los gangliósidos son glicolípidos sintetizados en el lumen del complejo de Golgi. Previamente demostramos que en células CHO-K1 el gangliósido GD3 se transporta desde esta organela hacia membrana plasmática por una vía vesicular no convencional, insensible a Brefeldina A e independiente de la actividad de Rab11. Posterior al arribo a la superficie celular, los gangliósidos son endocitados mediante un proceso no aleatorio. El transporte de glicolípidos a lo largo de las diferentes vías endocíticas ha sido analizado mediante el uso de análogos fluorescentes, radioactivos o toxinas. Nos propusimos estudiar en células CHO-K1 el transporte endocítico del gangliósido GD3, utilizando un anticuerpo monoclonal (R24) dirigido contra el mismo. Células CHO-K1 fueron incubadas con el anticuerpo R24 a 4°C para evitar endocitosis, lavadas y posteriormente transferidas a 37ºC para restablecer el transporte intracelular. Mediante técnicas bioquímicas, inmunofluorescencia y microscopia confocal observamos que a los 15 min el 55% del complejo GD3-R24 fue endocitado, acumulándose de manera significativa en un compartimento intracelular perinuclear. Dicho compartimento colocalizó con marcadores del endosomas de reciclado tales como Rab11 y transferrina, pero no con marcadores de complejo de Golgi. No fue factible detectar el anticuerpo luego de los 60 min de endocitosis, salvo que el anticuerpo estuviese presente en el medio de cultivo de manera constante. Utilizando diversos inhibidores, demostramos que el anticuerpo R24 no sería degradado por enzimas lisosomales y que abandonaría endosoma de reciclado utilizando un vía de transporte sensible a Brefeldina A y monensina. Los resultados indican que el complejo GD3-R24 es rápidamente endocitado en células CHO-K1 para posteriormente acumularse en endosomas de reciclado. Desde esta organela podría retornar de manera directa a la membrana plasmática o indirectamente a través del complejo Golgi.
