Los gangliósidos, glicolípidos que poseen ácido siálico, son sintetizados en el lumen del complejo de Golgi. En nuestro laboratorio demostramos que el gangliósido GD3, a diferencia de una proteína anclada mediante glicosilfosfatidilinositol (GPI) y de la glicoproteína del virus de la estomatitis vesicular (VSVG), es transportado desde TGN hacia membrana plasmática por una vía exocítica insensible a Brefeldina A. Además, la expresión de la forma dominante negativa de Rab11, la cual impide la salida de VSVG desde el complejo de Golgi, no influye en la capacidad de GD3 para arribar a la superficie celular.
Nuestros resultados indicaron que en células epiteliales CHO-K1 el gangliósido GD3 es transportado desde TGN hacia membrana plasmática por una vía vesicular no convencional; y de que debería ocurrir una segregación lateral de VSVG y proteínas GPI del gangliósido GD3 antes de la salida de estas moléculas del TGN.
Luego de su llegada a la superficie celular, los gangliósidos son endocitados mediante un proceso no aleatorio, que regula la calidad y cantidad de diferentes glicolípidos en membrana plasmática y membranas del sistema endocítico. El transporte de los glicolípidos a lo largo de las vías endocíticas ha sido analizado mediante el uso de análogos fluorescentes, toxinas marcadas o lípidos radiactivos.
Por otra parte, la endocitosis de numerosas proteínas ha sido estudiada mediante la unión de anticuerpos específicos. En este contexto nos propusimos investigar el transporte endocítico del gangliósido GD3, utilizando un anticuerpo monoclonal anti-GD3 (R24) en clones de células CHO-K1 que expresan este glicolípido. Los anticuerpos anti-glicolípidos han sido asociados con numerosas neuropatías, como Guillain-Barré, y además son potenciales agentes terapéuticos para el tratamiento de ciertos tipos de cáncer asociados con altos niveles de gangliósidos.
Cuando las células son incubadas con el anticuerpo R24 a 4°C, y posteriormente transferidas a 37ºC para restablecer el transporte intracelular, el gangliósido GD3 se localiza en vesículas en el citoplasma, y a los 15 min comienza a acumularse en un compartimento intracelular perinuclear, colocalizando con marcadores del endosoma de reciclado como Rab-11 y Tf, pero no con marcadores del complejo de Golgi. A los 60 min la mayoría de las células pierden la marca de R-24. Si el anticuerpo se mantiene en el medio de manera constante, la marca no desaparece.
Los inhibidores de la degradación lisosomal NH4Cl y cloroquina no pudieron evitar la desaparición de la marca de R24, lo que indicaría que el anticuerpo no está siendo degradado en lisosomas.
