Vesículas Extracelulares derivadas de Células Dendríticas: rol en el inicio de la respuesta inmune y efecto de Triiodotironina

Córdoba

Congreso; XX Congreso anual de la Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba (SEMCO); 2018

Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba (SEMCO)

Introducción: El sistema endócrino es una compleja red de comunicación que regula la homeostasis del organismo en conjunto con los sistemas inmune y nervioso. La disfunción tiroidea es el desorden endócrino más frecuente. Si bien un alto porcentaje son de etiología autoinmune, se desencadena comúnmente por estrés y cambios hormonales. Este grupo de investigación demostró la existencia de receptores de Hormona Tiroidea (HT) TRβ en las Células Dendríticas (DCs) de ratón, células presentadoras de antígeno profesionales e iniciadoras de respuestas inmunes adaptativas. Además se reportó que la 3,5,3´-triiodotironina (T3), hormona tiroidea bioactiva, induce su maduración (DCm) y activación funcional. En este sentido, DCs tratadas con T3 direccionan la respuesta adaptativa hacia un perfil Th1 (marcador: producción de IL-12), Th17 y citotóxico, in vitro e in vivo. No están completamente dilucidados los eventos que participan en la activación y amplificación de señales que modifican la funcionalidad de DCs, menos aún por efecto de T3. Las Vesículas Extracelulares (EVs) son nanovesículas lipídicas liberadas por todas las células, transportan en su interior ADN, ARN y proteínas, y poseen diversas moléculas en su superficie, por lo que se han postulado como importantes componentes de la comunicación celular. Objetivo: Caracterizar EVs producidas por DCs controles y tratadas con T3 e iniciar el estudio del rol de éstas en los efectos inducidos por la HT. Materiales y Métodos: Diferenciamos DCs de médula ósea de ratón (C57BL/6) y las incubamos con T3 (10 nM), o no (control), durante 18hs sin suero. Del medio condicionado se aislaron las EVs mediante ultracentrifugación diferencial reportada, obteniendo los pellets 2K, 10K y 100K. Las EVs se caracterizaron morfológicamente mediante Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM), el tamaño por Dispersión de Luz Dinámica (DLS) y los marcadores proteicos de las mismas (CD9, CD81, CD63) por Western Blot. Se diseñó un ensayo funcional para analizar la maduración y activación de DC inmaduras (DCi) inducida por EVs provenientes de DCs singénicas tratadas o no (control) con T3 (EVs-DC-T3 y EVs-DC, respectivamente), evaluando marcadores fenotípicos (CD11c, MHCII) y citoquinas intracelulares (IL12) mediante citometría de flujo. Los resultados fueron analizados mediante el test T-student, considerando p<0,05 como estadísticamente significativo. Resultados: Los resultados obtenidos mostraron la presencia de EVs de estructura morfológicamente conservada y morfométricamente heterogénea (TEM). Mediante análisis de DLS se determinó el tamaño de cada fracción de EVs: 2K (150-1000nm), 10K (50 a 600nm) y 100K (<150nm) y a través de los marcadores de superficie, su expresión en cada fracción. En el ensayo funcional, todas las fracciones de EVs-DCs-T3, y las 10K y 100K de EV-DCs indujeron un incremento de la expresión de IL-12 intracelular en DCs (p<0.05). Porel contrario, las EVs-DCs 2k no indujeron este efecto. Por su parte, los resultados obtenidos hasta el presente muestran que el estímulo con EVs-DCs-T3 100K (principalmente exosomas) a DCi mostraron una franca tendencia a incrementar la producción de IL-12 (vs EVs-DCs 100K) aunque sin significancia estadística. Conclusión: Demostramos que las DCs liberan EVs, mediando la comunicación parácrina entre DCs. Registramos que las fracciones 10K y 100K tanto de EVs-DCs-T3 como de EVs-DCs inducen la activación de DCi, con aumento de IL-12 intracelular. Por su parte, la fracción 2K sólo de EVs-DCs-T3 indujo el efecto mencionado. La comunicación mediante EVs es un mecanismo involucrado en la comunicación entre DCs, como también en la amplificación de la señal ejercida por T3 sobre DCs y el inicio de la inmunidad adaptativa. Es de destacar que las EVs de diferentes tipos celulares participan en la homeostasis del organismo. Por lo tanto, desbalances de este mecanismo podría afectar el perfil de activación-tolerancia de la inmunidad adaptativa.