Modificaciones en el metabolismo glicolítico de células dendríticas murinas por efecto de Triiodotironina

Córdoba

Congreso; XXIV Jornada Anual Científica de la Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba (SEMCO); 2022

Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba (SEMCO)

La respuesta inmune es iniciada por exposición de antígenos (Ags) a células presentadoras de Ags profesionales, como las Células Dendríticas (DCs), quienes activan a los linfocitos T (LiT) direccionando respuestas inmunes adaptativas. Uno de los modelos experimentales más ampliamente utilizados para el estudio de la biología de las DCs es la diferenciación de DCs a partir de progenitores de médula ósea de ratón cultivados con factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF, GM-DCs). A fin de ejercer sus funciones, las DCs modifican sus programas metabólicos en respuesta a señales del ambiente y ante estímulos inflamatorios. Las señales de maduración inducen en las GM-DCs una reprogramación metabólica caracterizada por un incremento en la actividad glicolítica en relación a la fosforilación oxidativa (OXPHOS). Este proceso es regulado por la activación de diferentes vías de señalización dependientes del tiempo. El compromiso sostenido hacia un metabolismo principalmente glicolítico, con uso preferencial de la glucosa como fuente de energía, se produce como consecuencia de la inhibición de la OXPHOS por la acción del óxido nítrico (NO), sintetizado por la enzima NO sintasa inducible (iNOS). Nuestro grupo de investigación ha demostrado que la triiodotironina (T3) induce respuestas adaptativas proinflamatorias y citotóxicas a través de la maduración y activación de las DCs murinas, mientras que restringe señales regulatorias. En base a estos resultados, se diseñó exitosamente la vacunación antitumoral a base de GM-DCs estimuladas con T3 (DC-T3) en modelos murinos de melanoma y carcinoma de colon, demostrando un menor tamaño tumoral y mayor sobrevida de los animales tratados con DC-T3. En base a lo expuesto, y considerando el potencial de la vacunación antitumoral con DC-T3, se propuso como objetivo evaluar los efectos de T3 sobre el estado metabólico de DCs. Para ello, se obtuvieron DCs inmaduras (DCi) a partir del cultivo in vitro de precursores de médula ósea de ratones C57BL/6 con el factor GM-CSF. Las DCi fueron estimuladas con T3 (10 nM) por diferentes tiempos. Posteriormente, se determinaron en los sobrenadantes de cultivo los niveles de glucosa y lactato utilizando kits comerciales y los niveles de nitritos mediante la reacción de Griess. A su vez, la captación de glucosa fue evaluada utilizando un análogo de glucosa fluorescente (2-NBDG) por citometría de flujo. Los niveles de expresión del transportador de glucosa 1 (Glut1) y de la enzima iNOS fueron analizados por Western Blot. Análisis estadístico: ANOVA, test-T, test-T concorrección de Welch o test de Mann Whitney, según corresponda, p<0,05 fue considerado estadísticamente significativo. Los resultados indicaron un incremento significativo en el consumo de glucosa en forma dependiente del tiempo en DC-T3 en comparación con las DCi. Además, la producción de Lactato fue mayor en las DC-T3 respecto a DCi (p<0,01). Asimismo, las DC-T3 presentaron un significativo aumento en la captación de glucosa, así como una mayor expresión de Glut1 respecto a las DCi (p<0,05). Por otra parte, se demostró una marcada expresión de la enzima iNOS en las DC-T3, la cual no fue detectada en las DCi (p<0,01). En consonancia, los niveles de nitritos indicativos de la producción de NO, fueron significativamente mayores en DC-T3 respecto a DCi (p<0,05). Este estudio evalúa por primera vez el impacto de la acción de T3 sobre el metabolismo celular de DCs, centrándose especialmente en la vía glicolítica. En este sentido, el incremento en la metabolización de glucosa por esta vía podría ser consecuencia de la inhibición de la OXPHOS inducida por el NO. Investigaciones actualmente en curso contribuirán a profundizar en el conocimiento de la reprogramación metabólica inducida por T3 en DCs, sentando las bases para el desarrollo de diferentes estrategias destinadas a manipular el potencial inmunogénico de DCs, actualmente en auge en diferentes protocolos terapéuticos.