ROL DE LAS SUBUNIDADES FKSP DEL COMPLEJO 1,3-beta-D GLUCANSINTASA DE CANDIDA GLABRATA SOBRE LA PRODUCCIÓN DE BIOFILM Y LA INTERACCIÓN CON CÉLULAS INMUNES

RODRIGUEZ, EMILSE; DUDIUK, CATIANA; MIRÓ, MARÍA SOLEDAD; GAMARRA, SOLEDAD; VIGEZZI, CECILIA; ICELY, PAULA ALEJANDRA; RIERA, FERNANDO; CAEIRO, JUAN PABLO; GARCÍA EFFRON, GUILERMO; SOTOMAYOR, CLAUDIA ELENA

Mendoza

Congreso; XVI Congreso Argentino de a Sociedad Argentina de Infectología; 2016

Sociedad Argentina de Infectología

Introducción: Candida glabrata es el segundo agente causal de candidemias a nivel mundial, siendo sólo superada por C. albicans. Las equinocandinas son consideradas como la primera opción para el tratamiento de candidiasis invasorapor C. glabrata. Estas drogas actúan inhibiendo las subunidades Fksp (codificadas por los genes FSK1, FKS2 y FKS3) del complejo enzimático 1,3-β-D Glucansintasa responsable de la síntesis del componente principal de la pared celular fúngica, los 1,3-β-D glucanos. La resistencia clínica de C. glabrata a las equinocandinas ha sido relacionada con mutaciones en FKS1 y FKS2, pero la participación individual de cada uno de los genes FKS en la virulencia de estalevadura y su efecto sobre la activación y estimulación de células inmunes no ha sido estudiada.Objetivo: Evaluar el impacto de la deleción de los genes FKS1, FKS2 y FKS3 de C. glabrata en la producción de factores de virulencia como la capacidad formadora de biofilm y en la inducción de mediadores inmunes en macrófagos en cultivo.Materiales y Métodos: Se generaron mutantes de C. glabrata defectivos en los genes FKS1, FKS2 y FKS3, utilizando el gen URA3 como casete de selección por tres técnicas distintas: PRODIGE, PCR de fusión y con enzimas de restricción,respectivamente. La transformación de las levaduras se realizó por la técnica de Acetato de Litio utilizando como cepa parental C. glabrata LMDM331 (ATCC 90030 ΔURA3). La capacidad formadora de biofilm (CFB) de las cepas en estudiose evaluó por el método colorimétrico de XTT y de acuerdo al desarrollo, fueron clasificadas como Baja, Moderada y Alta CFB. Para los estudios In vitro se utilizó una línea celular de macrófagos(Ma) murinos(RAW); las células se incubaron con cada cepa a dos relaciones patógeno:Ma (1:1 y 5:1) durante 24 hs. Posteriormente, la expresión de transcriptos de citoquinas proinflamatorias(IL1beta, IL6 y TNFalfa) y antiinflamatorias(IL10 y TGFbeta) se evaluó en las células inmunes mediante la técnica de PCR. C.albicans SC5314 se incluyó como cepa de control en todos los estudios.Resultados: La capacidad de las especies de Candida de adherirse tanto a superficies biológicas como inertes mediante la formación de biofilm es considerada un importante factor de virulencia. Mientras que C. albicans exhibióuna alta CFB, C. glabrata ΔURA3 fue clasificada como productora moderada (p<0.05). Las cepas con los genes FKS1 y FKS3 delecionados exhibieron una alta CFB, significativamente mayor que su cepa parental (p<0.001 y p<0.01). Laausencia de las diferentes subunidades FKSp del complejo glucansintasa no modificó la inducción del RNAm de IL6 en los Ma cultivados con el hongo. Todas las cepas estudiadas estimularon la transcripción de TNFalfa, observándose unamayor expresión en Ma expuestos a la cepa defectiva en FKS3. Mientras que, la expresión de RNAm de TGFbeta fue variable, no se detectaron niveles significativos de transcriptos de IL10.Conclusiones: El presente estudio demuestra que las subunidades Fksp del complejo glucansintasa de C.glabrata no sólo están involucradas en la resistencia a las equinocandinas, sino que pueden modificar atributos de virulencia del hongo como la capacidad formadora de biofilm y la estimulación de células inmunes.