REGULACION DE ZEB1 POR IGF1R EN LA TRANSICIÓN EPITELIO MESENQUIMATOSA DE CELULAS NMUMG DE EPITELIO MAMARIO MURINO

LLORENS, M. CANDELARIA; VAGLIENTI, MARIA V.; CABANILLAS, ANA M.

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2015

ZEB1 (Zinc Finger E-box Binding Homeobox) es un factor de transcripción de la transición epitelio mesenquimatosa (EMT). Previamente identificamos un fragmento aminoterminal de ZEB1 capaz de inducir EMT por si solo cuando es sobreexpresado en células epiteliales normales de mama de ratón NMuMG (NMuMGNZEB1). En el presente trabajo nuestro Objetivo es evaluar las vías de señalización capaces de regular la función de NZEB1 en el EMT. Células NMuMG-NZEB1 se trataron con activadores e inhibidores específicos de vías por 48hs: DMSO, IGF1 10nM, EGF50nM/mL, TGFb 5ng/mL, PMA 10ng/ml IONO 10ng/ml, Calphostin C 50 nM, LY294002 20 μM, PD98059 20 μM, UO126 20 μM, UO124 20 μM, NVP-AEW541 5μM y LiCl 50 mM. Los resultados de WB revelaron que ninguno de los tratamientos revierten la disminuida expresión de E-Cadherina inducida por NZEB1 lo que sugiere que el estado de fosforilación de este fragmento no es crítico para el rol de ZEB1 sobre EMT. Sin embargo, sólo NVP-AEW541(inhibidor de IGF1R) disminuyó significativamente la expresión de N-ZEB1 (P<0.05). Esta última condición (NVP5μM por 48 hs) se ensayo sobre otros marcadores de EMT como expresión y distribución de F-actina (Microscopía confocal e IF) y capacidad migratoria (Wound Healing) e invasiva (invasión en Matrigel) de las NMUMG-NZEB1. Los resultados revelaron que estas células tratadas con NVP, presentan tendencia a reorganizar los filamentos de actina de manera cortical, tipo epitelial-like , con una marcada disminución en la migración e invasión respecto delcontrol (P<0.001). A fin de evaluar la participación del proteasoma en el efecto de NVP, las NMuMG-NZEB1 fueron tratadas con NVP-AEW541 5μM y/o MG132 5μM durante 48 hs. La presencia de MG132 revirtió el efecto de NVP con aumento de la expresión de N-ZEB1. Los resultados sugieren que la vía de IGF1R podría ser capaz de regular la expresión de NZEB1 y consecuentemente el proceso de EMT, mediante la regulación de la estabilidad proteica de dicho factor via proteasoma.