Validación de un modelo de ratón de neovascularización coroidea (CNV) inducida por láser

BARCELONA, PABLO F.; SUBIRADA, PAULA V.; SABBI, TN; MÁRQUEZ, MA; VAGLIENTI, MARIA V.; RIDANO, MAGALI E.; MÁRQUEZ GE; PAZ, MARÍA C.; LUNA, JD; SANCHÉZ, MC

Córdoba

Congreso; XXXIII Congreso Anual de Sociedad Argentina de Investigación en Neurociencias; 2018

SAN- AIVO

Introducción. La degeneración macular relacionadacon la edad (DMAE) en su forma neovasculares una de la principales causas de pérdidade la visión en adultos mayores de 55 años.En este estudio validamos un procedimientoestablecido para la inducción de la neovascularizacióncoroidea (CNV, por sus siglas en inglés)en ratones. Este procedimiento consiste en laperforación de la membrana de Bruch mediante fotocoagulación inducida por láser, reproduciendola forma neovascular de DMAE.Objetivo. Caracterizar el proceso neovasculary su impacto en la funcionalidad retinal asícomo su perfil inflamatorio. Los trabajos previosrealizados en nuestro laboratorio demostraronque tanto α2M y su receptor (LRP1) participandurante la neovascularización retinal, por lo quetambién nos centramos en la participación delsistema α2M/LRP1.Métodos. A ratones C57BL/6, 3-6 meses deedad, previamente anestesiados, se les practicaroncuatro lesiones de fotocoagulación porojo con un láser de argón verde. Después de7 días de realizadas las quemaduras por láser,analizamos las lesiones de neovascularizaciónen flatmount de coroides-EPR mediante tincióncon isolectina B4 utilizando microscopía confocal.Al mismo tiempo, mediante inmunotinciónde marcadores específicos se caracterizaron lasdiferentes poblaciones celulares localizadas enel área de la lesión: CD105 (célula endotelial),NG2 (pericitos), F4/80 (microglía), así como ladistribución del receptor LRP1 en estas células.Además, los niveles de proteína de α2M y LRP1se analizaron por ensayos de WB y el perfil inflamatorio,evaluado por los niveles de IL1β, IL6y TNFα mediante ensayo de qPCR. La funcionalidadde la retina se evaluó mediante ERGescotópico. Resultados. Pudimos estandarizar el tamañode la lesión. Se observó una cantidad importantede célula endotelial y pericitos alrededor de lalesión. Las células de la microglía se localizaronen el área central y periférica de la lesión, mientrasque α2M y LRP1 mostraron un aumentoen el nivel de proteína acompañado de un granpatrón de expresión en células cercanas a lalesión; como así también se evidenciaron altosniveles de factores proinflamatorios y proangiogénicos.Las ondas a y b de ERG escotópico seredujeron (p <0,05) en los ojos de animal conla lesión CNV respecto de los que no recibieronel tratamiento con láser.Conclusiones. Pudimos reproducir y validarel modelo CNV en nuestro laboratorio, que nosbrinda la posibilidad de evaluar la participacióndel sistema α2M/LRP1.