Participación de la vía antioxidante Keap1-Nrf2 en retinopatías neovasculares: modulación por electrófilos

VAGLIENTI, MARIA V.; RIDANO, MAGALI E.; SUBIRADA, PAULA V.; PAZ, MARÍA C.; BONACCI, GUSTAVO; SÁNCHEZ, MARÍA C.

Córdoba

Jornada; ENCUENTRO ANUAL DE LA ASOCIACIÓN DE INVESTIGACIÓN EN VISIÓN Y OFTALMOLOGÍA; 2017

AIVO

La retinopatía diabética proliferativa (RDP) y la del prematuro (ROP) se encuentran entre las principales causas de ceguera irreversible. En la actualidad, los tratamientos existentes para las retinopatías intentan detenerlas, pero solo en casos muy puntuales logran mejorarla, y hoy es necesario que las estrategias terapéuticas apunten, no solo a la eliminación de neovasos (NV), sino también a promover la normalización de la vasculatura retinal a fin de rescatar a neuronas y células gliales de la muerte. Entre los mecanismos etiopatogénicos, la isquemia, estimula el aumento en la permeabilidad vascular a través de VEGF y en etapas más avanzadas provoca la formación de NV. Sin embargo, también intervienen componentes inflamatorios, daño oxidativo, y aumento en la producción de especies reactivas del nitrógeno (RNS), entre otros. Debido a ello, la modulación de la respuesta antioxidante podría ser utilizada como blanco terapéutico para estas patologías. Considerando que los ácidos grasos-nitrados (NO2-FA) tienen propiedades antiinflamatorias y citoprotectoras, mediante la activación de la vía antioxidante Keap1-Nrf2 entre otras, se convierten en moléculas de interés farmacológico en el tratamiento de patologías asociadas a procesos isquémicos e inflamatorios como las retinopatías. Es por ello que el objetivo general del proyecto es analizar los mecanismos moleculares involucrados en las acciones antioxidantes y protectoras de los electrófilos en patologías retinales. En este trabajo utilizamos como modelo experimental cultivos celulares de una línea de células gliales de Müller humana inmortalizada (MIO-M1). En primer lugar, con el propósito de elegir la dosis en la cual las células MIO-M1 responden a estímulos con ácido oleico nitrado (NO2-OA) sin afectar la viabilidad celular, se decidió evaluar la toxicidad a diferentes concentraciones del mismo utilizando un ensayo de MTT. Los resultados preliminares permiten concluir que el tratamiento con NO2-OA en concentraciones de 0,1 a 10 µM durante 24 a 72 h no afecta la viabilidad celular. Por otro lado, se evaluó la capacidad de las células MIO-M1 para responder ante un estimulo de NO2-OA a través del aumento de enzimas antioxidantes tales como hemo-oxigenasa 1 (HO-1). Para ello, se estimuló las células con NO2-OA, y se midió por WB la expresión de HO-1 a 8 y 16h post-estímulo. Los resultados mostraron un aumento significativo de HO-1 con una concentración de 5 µM de NO2-OA a partir de las 8h post-estímulo. En función de estos resultados se prevé la utilización de NO2-OA en un modelo in vivo de retinopatía inducida por oxigeno (OIR) a fin de corroborar la acción antioxidante de los NO2-FA.