The circadian system comprising oscillators present in organs, tissues and even in individual cells temporally controls the body physiology. At the molecular level the ?clock genes? (CGs) regulate their own expression and that of others ?clock controlled

MONJES, NATALIA M.; GUIDO, MARIO E.

Mendoza

Jornada; VIII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2019

Introducción. El sistema circadiano comprende osciladores presentes en órganos, tejidos e incluso en células individuales, y es el encargado de controlar la fisiología del cuerpo de una manera temporal. El hígado presenta un reloj en estrecho vínculo con el metabolismo, y aunque se sabe que es ampliamente influenciado por los horarios de las comidas poco se conoce de su funcionamiento a nivel molecular en condiciones de proliferación exacerbada como es el caso de las células cancerosas. A su vez tampoco está del todo claro el rol que cumple el reloj en el metabolismo lipídico ni la forma en la que se interconectan estos dos circuitos.Objetivo. El objetivo de este proyecto es investigar el funcionamiento del reloj molecular y su relación con el metabolismo lipídico en células en cultivo de heptocarcinoma humano (HepG2). Métodos y resultados. Desarrollamos este estudio con células en estado proliferativo, manteniéndolas con 5% de suero fetal bobino (SFB) luego de una sincronización con dexametazona (DX) 100nM. Se analizó por PCR a tiempo real la expresión de genes reloj (GR) (Bmal1, Per1, Cry), genes controlados por el reloj (GCR) (Rev-Erb) y la expresión de algunas enzimas involucradas en la biosíntesis de fosfolípidos (FL) (Chk, Pcyt2). Los niveles de ARNm para la mayoría de los genes estudiados presentaron diferencias temporales significativas. En cuanto al contenido de proteínas se estudió mediante inmunocitoquímica la presencia y distribución de BMAL1, PER1 y CHK, observando también cambios en las cantidades relativas a los diferentes tiempos estudiados. Además se estudió el contenido endógeno de glicerofosfolípidos (GFLs) por TLC y se detectaron variaciones dependientes del tiempo en los niveles total e individual de GFLs. Por último, con el fin de analizar más a fondo la manera en la que el reloj se vincula con el metabolismo lipídico, se analizó el contenido de gotas lipídicas (GLs). Este estudio se realizó tanto en células HepG2 normales como en un clon de las mismas células deficientes en la proteína reloj BMAL1. Se observó que la cantidad, tamaño y variación temporal de GLs se veían afectadas ante la disminución de BMAL1 en comparación con las células normales. Conclusión. Este estudio sugiere la existencia de un control activo dependiente del tiempo por parte del reloj circadiano en células tumorales de hígado, tanto a nivel de expresión génica como a nivel del metabolismo lipídico.